Способ получения гемпептидных фрагментов цитохрома с Советский патент 1976 года по МПК C07K14/80 C07K1/10 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМПЕПТИДНЫХ ФРАГМЕНТОВ

ЦИТОХРОМА с ioT до рН 4,0 (с помощью 6 нНС1), экстра гируют этилацетатом, упаривают. Остаток промывают этанолом. Выход 78,8 мг (87,4%). Электронный спектр в виде гемо хромогена с. пиридином, восстановитель Ha SrOA; . 52О, 551 км. + f95,7(C 0,6, 4%.КН40Н). Соотношение аминокислот в гйдролиаате гемгептапептида: Alal,0,,0, T1ii;i,4, OL.i,2, ,32 (Asp 0,9 - продукт разложения в условиях кислотного гидроли заТ.Сп определен в виде Cvs $0,Н . П р я м е р 2. Гемдекапептид, соот ветствующий участку 13-22 белковой цепи цитохрома С. а)7О,4 мг метилового эфира гемгептапептида, полученного по примеру 1 cycnent дируют в 2,5 мл ДМФА и добавляют 0,025 мл гидразингидрата. Перемешивают 48 ч при 20 С, разбавляют воаой в 1О раз, подкисляют 6и. НС1 до рн 6,0. С)садок отделяют иентрИ1|)угированием, тщательно примывают этанолюм. Выход 65,5 мг (93%). Электронный спектр в тех же условиях), Л. „...,.522, 551 им. newtб)растворяют 5 О мг гид рази да гемге птапептида в 5 мл ДМФА с несколькими каплями 25%-ной НИдОН. Избыток аммиака упаривают, добавляют 2О мг трипвптидахлоргидрата бенэилового эфирю If -в« лил-У-бензил-Ь-глутамил- N -трифтораUBTHri-t-лизина. При О С добавгш1от2 млрасгBopaEijN вДМФЛ (О. I мл ЮмпДМФА и 5 мл раствора йода в пиридине ( 7ЙГмг йода 10мл пиридина). Перемешивают 1 ч при О°С |3 ч при 2О С. Добавляют тиосульфат натрия, вштавший осадок отделяют центрифугированием. Промывают этанолом. Растворяют в смеси ДМ ФА: 25%-ная : 1 и обрабатывают амберяитом |ХЕв96 в Н форме. Растворитель отгоняют. Выход 53 мг (76,5%), Электронный спектр, - MAKtSlS- 550 HM-Cct +107°( О,4 j 12% NHj| ОН). Соотношение аминокислот Л в гидролизате гемдекапептада: 3.уб2,О, rferl,4,Gt«2,3,VolO,8, А1й1;2,ШЧ О,2, spl,l (продукт разложенияННв условиях кислотного гидролиза),Су найден в виде Cy«-SO,H. Формула изо бр е т е н и я ; Способ получения гемпептидных фрагмен-f «др цитохрома С, о тли ч а ю щ и й- / с я тем, что гемгексапептид, отвечающий участку 13-18 белковой цепи гемопротеи Дб одве ают взаимодействию с метиловым , эфиром треонина в присутствии пивалоил- хлорида с последующей обработкой полученного гемпептида 13-19 гидразингидР 1 М,. с соответствующими защищёнными пёптиаамй в прйсутствии |1Года в щелочной среде в органическом растворителе. Источники информации, принятые во внимание при экспфтизе: 1. Васильева Г. А. и др. Синтез гем- пептидов-4 гментов цитохрома С. ЖОХ, 42,l4O2, 1972.