Способ подготовки кукурузного экстракта для приготовления питательных сред Советский патент 1976 года по МПК C12B3/12 

приготонти нил ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

ХУК:/РУЗ -ОГО ЭКСТРАКТА

Изобретение OTHOCi-iCi: к c:i;ij-4)i, ::;. кукурузноги JKCToa ;;;; (;к)бс-ч:;и:ч; произвоцстла к;)ахмала n.s K K /pv-jjior, к;1м: ОНС Па п Пяте;;Ь 1С) споль; л:1я биос; микробных фсрмсиюБ, iiaiipiiMCi Г ензг лпепил ллинацилазы или L л1С1и1р;;гии;;ЗЬ;.

.Известен еиособ г;ол)1иовки iiioi-o ;кстракта. используемого лля ириготовлешн; питател1Л ых срел, согласно которому кукуруз1;ый экстракт, содержа1Ш Й 10 вес.Р- сухих ;зе1леств. соражквают дрожжами при аз 5ации после нагрева в щелочных условиях оглелают осалок М j,

Приготовить кукурузный экстракт с бо;1ьншм содержакисм сухих вешесгв в данном случае не представляется возмож 1ым, так как в таком экстракте не происхо;шг броже1Н1е лрож;жей. Кроме того, нри такой подготовке из экстракта удаляютс еоедине1шя о -фосфорной кислоть;, что не обеспечивает ноложи ге.чьного эффекта нри биосинтезе ферментов, не ингибируемьгх фоечЬаюм, н;апример L -аспарагиназы и бензилпенипилл1- нан1,илазы микроорганизмомЕо Cot:

Биосинтез ферме ггов на ни.татслык) среде.

;к-н; ;1Г1:)5леннои нз кук p}3iioxj зкстрак1е. lop:;,--;л НСл: Л- . лны спосс бол;, чоз1;;;-1 телсл

JLia :i. .icHri)HKauMii биоснн ic:ia мнкр б,; попментов нреллагаетск аэ:л1Л1 :(1 ткетгркта :лу ; стнляп, нри 10-., Птл этом ис1:ольз 1; / рак; с содержанием сххих вен-ссг;; 40 6Г1 :-ес.

Периодически, по мере аэрирования к :-;л- ,:IO экстракла, из него отбираютироб1)1 jui;; б)-с то1Ического нспьггания нчд-ем пробного к -льги15и;-о а ния в колбах.

. эр1розание прекращают, ког.да в pe:j Л1 к-;;с биологаческого испытания нроб, отобран.чых с .читерва-чом в 4-5 дней, одинаковые.роз..:.таты.

Положт-пельно сказывается на качестве экоракта периодическое его перемеишванне. 1 ов -лн-ение температуры к} куруз1 ого экстракта нри аэр1 рованни н увеличение расхода воз.духа способегпус-i ускорению нропесса, но при этом увеличивается его вспенивание. Наиболее оптим;С1ьнымн условиями нодготовки кукурузного экстракта яв.чяется температура, при которой осуществляют его аэрирова3

ние (20 ) и скорость воздуха 0,1 - 0,2 об. на об. J4y vpv3i; ro :зкстракта в 1 мин.

В таЗл. пре/1став: ень; значения L -аспарагиL асиарагиназная 1емнература.,

4

.чазной активности в МЕ/мл среды с 4/; кукурузнсго экстракта в зависимости от температуры eit) аэрирования.

Т а б л к ц а 1 активность, МН/мл при длительности аэрировашя. CVTKH ;

3,3

4,2

5,2 7,2 3.7 5.9 7,5 5,0 7.0 7,4 .4 7.2 7.3

7,4

Как счеду - из приведенных в табл. 1 данных, выхо.ч за ирсде;гы казанных границ температурь криводич либо к сильно.му замедлению npoiiecca, ли5о к yxy.iuneiuno резу.гцлатов.

ЛовИ;1имому, аэрирование гфиводит к удалению из K kypyj iO -o jKcrpai: la репргссоров и HiiiHбиторив биосинтеза фер.ментов, например глюкозы и некоторых а.минскис.ОТ, известных как кагабодитник; репрессоры ииоси {теза дгя ряда ферментов. Удаление этих веииств при аэрировании может происходить как за счет прямого окисления их (,,ом возд«ха, так и за счет протекаюших при jTOM биохимических процессов.

П р f: м с р 1. В реактор емкостью 13000 л с MCiiiajiKOH, рубашкой и барботером загружают

L - аспара;иназпая активность,

МЕ/мл

Бензилненициллинацилазная активность, ед/мл

10000 кг к куруз1 ого э.ксгракта и через него

непрерыв1го продувают .чоздух со скоростью 1.500 /№-п. Ежедневно несколько раз на 10 -- 15 NWH включают мсдиа;1ку. Подаче.й о.х..1аж; а1опдсй вод.. в рубапжу реак;ора ноа.;.;п живают темиерятуру куурузного эксгракта в лредедах 20 - (.

Через 20 длеь. когдя по результатам нробчой ферментации в кочбах (био.югическч . ихттьгга.н:MaKCKMajjbiiai фермепгпая активи - гь ает увели-шваться, процесс :ше.;рати.г1и.

В табл. 2 приведе -: ; ,,ан})ые о максима-П. ферментной активности культуральной MOUIKOCTM нри биологической подтитров се (пробной ферме.чтаиии) ао мере а рированкя кукурузного экстракта.

Таблица 2

4,5 6,6 8,58,6

15,0 20,8 23,9 24,2

Затем из реактора берут 2 кг кукурузного экстракта (в пересчете на сухое ьещество), разбавляют водой примерно в 2 раза, доводят рИ раствором натра до 7.3, нагревают по 90°С, вьшер-пвают -,ри этой темлератург 10 мин и выче; :Чзнл-1Йся осанок отфильтровываю г.

{ асгворимую часть кукурузного экстракта переносят в ферментер с рабочей емкостью 100 д. приба.дяют 00 г феиклуксусной кислоты. дово;и:т объем водой до 100 л и р1 раствором едкого натра до 7,3. Приготовленную среду стерилизуют в ферментере при в течение 40 мин.

Посде охлаадения среду засевают нрод)-центо. беизилпениаидлинацилазь Е. Coli Rg- и ведут

ку ь;гк1ро/1анис

- ПРИ иом.-педу перел;еНЭДВаН); Ci) ).bK.i 2 1)0, МИ И аэпипую: со

скоростью J 5 л /мин. Сн i/i 2 час с иача.а роста з Oмeн- слив;; рМ к KbiiOi ,f}Cni сос;;1вил :i, KOiEi CH:nauM F б;о ., -: -/ г л, пснкцилли}-а5 р;льиой ;с- дкос1м 21.4 ejVM;i, удельная активное:, ои(ассгл 5,5 с;; мт.

Из этого же реактора берут 4 кг ,010 экстракта (в пересчете да сухое вещсстиМ , обрабатьгвают его, готовят 100 л нитатедыюй сре.чы. засевают и культивипую.

Спустя 20 час с 1 ач;ьта культивирование прекращают. К слива pil культуральной жидкости S.O, К01и:,е} транля биомассы 7,0 г:л, неницилпинацплазкчя активность к -льтуральной жидкое;:; 38,4 ед/г.сг ;;льная активность биомассы 5,5 ед/мг.

Из реактора берут 260 кг кукурузного экстракта (в пересчете на сухое неисстао) и загружают в

аппарат. разСлвля .)г ьсДО .чо ооъсма ООС,;. ловоДЯ1 рН раствором едкого i;arp; до ,4. нагрсвак - до 85 С, вьаерживают ирг; этой тсмисрат)-рс 15 мин iвьи1.елиншийся оеа.и к отфильгров-дваю.

Затем фильтра передают г ферменгсо емкостью 10 М в КС10,Л, За р ЖЧ1Г 34 кг -КС С1 Окисдого нагрия ; 13 к; сс 1нок1 сло о .-ммип;). дово;шт объгм , :ч)00 :: л vranaR.1иваюг ;И растворОМ NdO 7.7

Пригого лечн ;о среду стерилиз KVI в фермс гер 1 час при i и пос.че о.;аж; е;1Ия /о 2-Г засевают 500 л культуры h. COiiRg Л iipon neiira L -аспара;т; ;а:)ы. выpaиIe п oй в течение 10 в

Г 1C.

ванн i 0 ооМин и j naiiin; 450 ;i мин.

1с ч.;с ; i;:i4aJia pocia. KtHCia oil ку.ч.:ра:;ьио1 жялко.чн . к ииен гралия Омо.1 ассь: 7.

- L --aCHai.arii;, аКГИВЛОСгЬ К. .ЫХМХ;; : ОЙ Ж1Г1КОСГИ -. NlFM;; .; ЧсЛЬНая .;K:-;...: oiio i:iccb; ;. 1I: м;. к льтирир вагшс нпсчиа;;;.

L - аснарашназы и оснзилненидилли1:аии. i исиользованнем нескольких нарт;); азр,-:чл::и11 ог. при 20 - и необоаботанного кхкч-рузн.мо экстракта на обычн :1х (-табл.З) li конце л;Л о IB:-:ных (табл. 4) срелах при к -льтивиосв;1Н1, ч сч-оментерах емкостью 200 ;г а лсржанис чукх; - i. -:, экстракта везде дасся ;, пересчете на пс:;;о,.--Номер партии

кукурузного

экстсркта

18,6 14,8

J а о л и ц а л

к о

.i;i:-iH;ui;-iJia3iiaH .1юсть на среде с 4, кукурузного .жстракга, ед;м;

1

} необработанный | аэрировапн1,ш

ilpiiBcaeiitibie данн1 1е ноказываюг, что аэрирование кукурузного экстракта нрИ 20 3()(11оч1 ол.ч, е; ;р|;ме 1яП) ачя биосинтеза L aciia.;aiT-iiia:u,i и ,;л:. .: ненициллинанидаз, дюб,1е кукуоузHi-.i жс-пактон, причем ферментная ак(и;5носп кудь|у| лл -ной ж |дкости возросла на 10 15 :нри иснол1,.л,;в;н.:11и xojXMjiHx нартий и 2 3 раза и вьнне нри HcrrojH 30iiaHHH 1шохих партий кукурузН1,;х -jKCipaKroii.

Как ВИД1Ю из представденных в табл. 3 данных, использование аэрирова1 ного при 20-30 С кукуpv-ji,4H-o жегракта обеелечивает получение высоких :io :1 роизв(ди.мых результатов по активности культу1хшьно11 жи.дкости при работе с любыми партиями кукурузных экстрактов, что не только гарантирует ритмичную работу произвоцства, 1ю и позволяет существенно повысить съем фермс {та. При эго.м, как следует из данных табл. 3 и 4, применение аэрированного кукурузного экстракта позволяет vcneiHHO использовать коипентрированиые среды. При биоси1ггезе ац.илазы активность культуральной Ж-Ц.ЧКОСТИ на ере.де с 49г аэрированного кукурузного эксгракта ночти в дна раза превышала активность

40,1 46,0 -1,7

36,0 44,2

lui иснользуе ои в производстве среде с 2- K KVруз1-;ого Э1 стакта нрл сохранении вьхокой .-.ле.тьiioij акчишичл би(массы. Применение же спелы L 4 JpiipoBaiiJO: t, кук рхзного .кс ;: .IK la не дае ночожи i слы;о;.: )ф(д..: i

Фор м } д а из ;j б ) е i е н и я

Способ подготовки кукур 31юго экстракта

35 jjjiH приготовления питательных сред, включающий аэранию экстракта, о т л и ч а ю nj и и с я тем. что, с интенсификапии биосинтеза ми.кробных ферментов, используют экстракт с содержание.м сухих веществ 40 60 вес. г, а аэрацию его осуществляют

Источники информании. нрннят1 1е во внимание при экспертизе;

45 1. Патент США № 2444680, 145-103. 0.09.48 г (прототип).