Способ получения водонерастворимых ферментов Советский патент 1976 года по МПК C07G7/00 C12D13/10 

5 Полимеризационная смесь предпочтительно состоит из 7-12% акриламида, 0,7-1,2% N,N -метиленбисакрилаЕущда и полимеризацию проводят под действием N,N,N, - честве модификатора целесообразно испол зовать глутаровый альдегид, который вводят в полимеризационную смесь в концентрации 0|5-2,О%. Полученные по предлагаемому способу препараты дредставляют собой упроченный неорганическим скелетом полиакриламидный гель, в структуру которого включен фермент. Энзиматические свойства пpeпapa тов в основном зависят от состава полима ризадионной смеси. Наряду с немодифициро ванным гелем этим способом целесообразно полимеризовать смесь, содержащую в качестве модифицирующего сшивающего агента глутаровый альдегид. Полученные ферменты характеризуются повышенной механической прочностью по сравнению с известными препаратами того же состава, но не содержащими неорганический скелет. Применение этих препаратов позволяет улучшить контакт катализатора с субстратом в колонках, реакторах перемешивания и других установках. Пример 1. Приготовляют 5001 смеси бензилпенициллинацилазы активность 100ОО ф,е. /мл (за единицу действия бен зилпенициллинацилазы принимают такое е количество, которое гидролизует калиевую соль бензилпенициллина в О,63%-ном раст воре при 4О + 1 С и рН 7,5 с образованием 1 ыоц 6- аминопенициллановой кислоты Б 1 час), содержащей (в %); акриламид 9; N,N-метиленбисакриламид 1; глутаровый альдегид 2,0; Ы,М,Н,N - тетраметилэтилендиамин 1. Полученную смесь охлаждают до 5 С и пропитывают ею 250 г зерен сухого сорбента Сферохром-2 (Горьковская опытная база ВНИИНП, фракция 0,1-03 мм) в течение нескольких минут. Затем при температуре, не превышающей 5 С, в перемешиваемые зерна сорбента добавляют по каплям 10 мл 50%-ного водного раствора персульфата аммония. После образования геля в порах сорбента материал многократно промывают. Получают 730 г препарата активностью 2740 ф.е./г влажного материала. Выявляемая активность по сравнению с теоретически ожидаемой 66.6%. 2ОО г влажного иммобилизованного фермента бензилпенициллинацилазы с актив ностью 2740ф.е./г инкубируют в течение 110 мин в 350 г (0,97 моль) калиевой соли бензилпенициллина 70ОО мл дистиллированной воды при 40+1 С и автоматическом поддерживании рН 7,5 25%-ным аммиаком в реакторе периодического действия с перемешиванием. Получают раствор с содержанием 6-аминопенициллановой кислоты 0,89 моль (91,9% от теории). Пример 2. Водонерастворимый фермент трипсин (фирмы Спофа, ЧССР) получают по примеру 1, но при этом используют 1 мл фермента с эстеразной активностью 100 Е/мл. За единицу активности Е трипсина принимают такое количество фермента, которое гидролизует 1 мкмоль (0,02 М раствор) специфического субстрата - - N -бензоил- L -аргинин метилового эфира. Раствором фермента пропитывают 0,35 г сорбента Stepcha-moE (фирмы SchuchapcEt Munchen ). Получают 1,65 г влажного иммобилизованного препарата трипсина активностью 4,25 Е/г, Выявляемая активность по сравнзнию с теоретически ожидаемой 7,0%. 19,7 г влажного сорбента помещают в колонку сечением 4,16 см (4,65 г/см) и пропускают через нее воду с максимальной скоростью 33,3 мл/мин. Полиакриламидный гель с размером частиц до 0,5мм в тех же условиях позволяет повысить скорость протекания до 5 мг/мин. Пример 3, Водонерастворимый фермент трипсин получают по примеру 2, но в полимеризационную смесь добавляют 0,1 мл 5%-ного глутарового альдегида. Получают 1,7 г влажного иммобилизованного препарата трипсина в носителе StefChamoe активностью 20,6 Е/г. Выявляемая активность по сравнению по сравнению с теоретически ожидаемой 35%. Формула изобретения 1.Способ получения водонерастворимых ферментов путем заключения фермента в полиакрила мощный гель полимеризацией смеси акрильных мономеров и модификаторов в растворе фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения механической и энзиматической стабильности и уменьшения гидродинамического сопротивления получаемых ферментов, поллмеризуемую смесь вместе с ферментом впитывают в пористый неорганический носитель и полимеризацию проводят в порах последнего. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что пористый неорганический носитель представляет собой кремнезернистый или метаболический материал с диаметром пор свыше 70 нм. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что Полимеризационная смесь включает 7-12% акриламида.

5308856

0,7-1,2% N, N -метиленбисакриламида ию щ и и с я тем, что в качестве модифиполимеризацию проводят под действием N,N,катора используют глутаровый альдегид,

тетраметилэтилендиамина.который вводят в полимеризационную смесь

4. Способ по пп. 1 и 3, о т л и ч а -в концентрации 0,5-2,.