Способ получения циклопептида Советский патент 1976 года по МПК C07K1/08 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛОПЕПТИДА

), fHz

co-NHuHCo . . , T-f - «о

CHj СНз Ч

СН(СНз)

где R означает ацильный радикал, который может входить в следующую группу радикалов: алканоил, аценоил, алкадиеноил, алкилоксикарбонил, аралжаноил, ароил, арилсульфенил, арилсульфинил, арилсульфонид, циклоалкилкарбонил, гетероциклилкарбонил, гетероциклилалкаиоил или остаток линейного или циклического пептидного радикала, который одной карбонильной группой связан с атомом азота Ь-4-7/7анс-метилпролина в боковой цепи циклопептида.

Алкильные, аценильные или алкадиенильпые части вышеуказанных радикалов представляют собою линейные или разветвленные цепи, содержаш,ие 1-50 атомов углерода, возможно замешенные одним или несколькими атомами галогена или радикалов (аминиого или алкилтиолового с содержанием 1 - 5 атомов углерода).

Алкильные части алкилоксикарбонильных радикалов с содержанием 1-5 атомов углерода могут быть замещены диалкоиламинорадикалом, дающим алкильные части с содержанием каждая атомов углерода. Ароматические части аралканоильных, ароN-СНз

ильных, арилсульфенильных или арилсульсн-сн(ен.з) фонильных представляют собою бензольное или нафталиновое кольцо, возможно замещенное одним или несколькими радикалами: алкилами, гидроксилами, бензоилом, аминогруппой, диалкиламиногруппой, алканоиламиногруппой или нитрогруппой, алкильиыми радикалами и алкильиыми частями других радикалов с содержанием 1 -12 атомов углерода.

Гетероциклические части гетероциклилкарбоиильных или гетероциклилалканоильных радикалов представляют собою моноциклические гетеросоединения, содержащие один или несколько гетероатомов, входящих в группу атомов азота, кислорода или серы и возможно замещенных одним или несколькими алкильными радикалами или нитрогруппой. Циклоалкильные части циклоалкилкарбонильных радикалов представляют собою пятичленные или шестичленные циклоалкильные радикалы, возможно замещенные одним или несколькими аминными радикалами, аминорадикалы, замещающие алкильиые, алценильные или циклоалкильные части радикалов,

природа которых указана выше, причем аминные функции пептидных линейных или циклических радикалов могут быть замещены одним или несколькими алкильными, алканоильными, аралкильными, алкилоксикарбонильными, аралкилоксикарбонильными или алкилоксиаралкилоксикарбонильными группами. Алкильные радикалы или алкильные части других радикалов могут содержать 1 - 30 атомов углерода.

В соответствии с изобретением циклопептид указанной общей формулы получают из соответствующего циклопептида со свободной иминной группой пролина путем конденсации с активированным производным кислоты, например карбодимидным методом.

Циклопептид А (R в этом случае замещен атомом водорода) может быть получен путем контролируемого гидролиза антибиотика 11072RP, синтез которого описан во французском патенте 1393208. Антибиотик 110072 RP может быть гидролизован в циклопептид А органической или неорганической кислотой в органическом растворителе. Лучше всего использовать для этого безводный метанол в соляной кислоте. Реакция выполняется при 20С в течение 2 ч.

В качестве методов конденсации можно упомянуть, например, методы с использованием карбодимида, например дициклогексилкарбодимид, метод со смешанным ангидридом.

В соответствии с этими методами свободные функциональные группы, которые не должны участвовать в реакции, замещают группами, обладающими способностью к последующему элиминированию без взаимодействия с остальной частью молекулы. Обычно используют для этой цели остатки, которые могут быть удалены гидролизом или восстановлением. Аминогруппа обычно, защищается такими алкилоксикарбонильными соединениями, как г/ ег-бутилоксикарбонил, аралкилоксикарбонил, как бензилоксикарбонил или аралкил (как бензил).

Смещанный ангидрид обычно получают действием алкилхлорформиата, например этилового или изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты, на кислоту R-ОН в органическом растворителе, например в хлористом метилене в присутствии органического основания, например триэтиламина при -10°С.

Продукты согласно изобретению обладают ценными свойствами в терапии.

Это антибиотики с высокой антитуберкулезной активностью и высокой активностью в отнощении грам-положительных и грам-отрицательных бактерий.

Эти соединения дали хорошие результаты при испытаниях их на противотуберкулезную активность. Они угнетают размножение вирулентных туберкулезных бацилл, например щтаммов, действующих на человека, коровьего штамма и различных устойчивых мутантов.

Активность in vitro определяется путем разбавления сред Дюбо. В этих условиях минимальная угнетающая концентрация находится между 0,005 и 1 мкг/мл.

Особенно интересны продукты общей фор5 мулы, где R - это алканоильный или альценоильный радикал, замещенный амино- или алкилтиогруппой, или же линейпым пептидным радикалом, причем аминные радикалы могут быть еще замещены по вышеуказап10 ному.

Активность in vivo определяется на экспериментальных инфицированных мышах путем введения указанных соединений в течение трех недель, начиная со дня, следующего за 5 заражением. Нелеченые мыщи погибали за 20-30 дней. В этих условиях были определены минимальные эффективные дозы 50- 300 мг/кг (через рот).

Особенно эффективны продукты общей 0 формулы, где R - это алканоильный радикал, замещенный аминогруппой или линейным пептидным радикалом, причем аминные радикалы сами могут быть замещены по вышеуказанному.

5 В медицине можно использовать новые соединения в виде оснований солей от присоединения к ним кислот или четвертичных аммониевых солей, приемлемых для фармацевтики, т. е. нетоксических в тех дозах, в которых 0 они используются.

Как примеры получения продуктов от присоединения фармацевтически приемлемых соединений, можно назвать соли минеральных кислот - хлоргидраты, сульфаты, нитраты, и 5 фосфаты или соли органических кислот (как ацетаты, пропионаты, сукцинаты, бензоаты, фумараты, малеипаты, тартраты, метансульфонаты, бензолсульфонаты, теофиллинацетаты, салицилаты, фенолфталинаты, метилеп0 бис - бетаоксинафтеаты) или замещенные производные этих кислот.

В качестве четвертичных аммониевых солей, приемлемых с точки зрения фармацевтики, можно назвать сложные эфиры неорга5 нических или органических производных. Сюда относятся хлорметилаты, бромметилаты, йодметилаты, соответствующие этилаты, аллилаты или бензилаты, метил- или этилсульфаты, метапсульфонаты, бензолсульфонаты 0 или замещенные такого рода соединения.

Качество продуктов в нижеследующих примерах определяют хроматографически в тонком слое на силикагеле.

Пример 1. Получение циклопептида А 5 150 г пептида - антибиотика, полученного по французскому патенту № 1393208, растворяют в 1320 мл 4,5 н. раствора хлористого водорода в метаноле. После перемещения в течение 2 ч при 20°С раствор концентрируют и 0 выпаривают его досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток экстрагируют дважды, каждый раз порцией по 250 мл метанола. Эти вытяжки дают после выпаривания аморфный остаток, который растворяют в смеси хлороформа-метанола (95 и 5 объеMOB соответственно). Полученный раствор сливают через колонку диаметром 11 см, заполненную 2 кг силикагеля. Элюирование проводят тем же растворителем. Собирают фракции до 640 мл каждая. Фракции 10-16 дают 123,3 г хроматографически чистого циклопептида А с выходом 95,5%.

R/ - 0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : 35 но объему); (а)22 -62° (с 0,5 в метаноле).

Пример 2. Растворяют 3,35 г циклопецтида А в 70 мл этилацетата. Добавляют 1,13 г Na -ацетил-Ы -бензилоксикарбонил-Ь-лизина. Смесь охлаждают в ледяной бане и добавляют 0,8 г дициклогексилкарбодимида. Перемешивают 2 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане, затем выдерживают в течение 15-20 ч при 20°С. Добавляют 5 капель ледяной уксусной кислоты и отфильтровывают нерастворимую часть. Осадок промывают этилацетатом, объединяют органические вытяжки и выпаривают их досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 10 мл этилацетата и промывают полученный раствор последовательно 2%-ным раствором двууглекислого натрия, нормальной соляной кислотой и дистиллированной водой. Органическую фазу высушивают над безводным сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают фильтрат досуха при 25 мм рт. ст.

3,14 г сырого остатка пропускают через колонку диаметром 3 см с содержанием 75 г силикагеля. Последовательно элюируют бензолом, смесями из 9 объемов бензола и 1 объема этилацетата, затем смесями 5:5 (также в объемах), далее смесями 90:10 или 75: : 25. Фракции, элюираванные этилацетатом и двумя смесями этилацетата и метанола (95:5 и 90:10 или 75:25) объединяют и выпаривают досуха при 25 мм рт. ст. Получают 2,13 г (Na -ацетил-Ыг -бензилоксикарбонил - L - лизил)-циклопептида А с вы.ходом 48,5%.

N 12,43% (теоретически 12,20); (a)5S -67,7 (,5 в метаноле); R 0,73 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему).

Таким же образом из подходяш,их исходных продуктов получают:

(N-бeнзил-N-мeтил - L - валил) - цнклопептид А

С 64,13% (теоретически 64,30); Н 8,53% (теоретически 8,67); ,67 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему);

хлоргидрат (N-бензил - N - метил-В-валил) - циклопептид А

,50% (теоретически 11,69); С1 2,95% (теоретически 2,96); ,87 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : 35 по объему);

метансульфонат (N - бeнзил-N-мeтил-D,Lвалил) - циклопентида А.

N 10,59% (теоретически 11,13); 5 2,65%

(теоретически 2,55); R/ 0,74 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол - 80:20 по объему);

(N - бензилоксикарбонпл - Ь-валпл)-циклопептид А

,93% (теоретически 11,76); (а)° -73,2° (с 0,5 в метаноле); Ry 0,85 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65:35 по объему);

(N - бензоилоксикарбонилглицил) - циклопептид А

,87% (теоретически 12,18); R; 0,40 (силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 8 : 12 по объему);

метансульфонат (N - бензил€аркозил)цИ1Клонептида А

N 10,81% (теоретически 11,52); 5 2,89% (теоретически 2,64); Rf 0,77 (сплнкагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : : 35 по объему); (N - деканоил-Ь-валил)-циклопептид А

,60% (теоретически 11,56); ,83 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 8 : 2 по объему);

(ундецен-10-оил) - циклопептид А С 64,33% (теоретически 64,08): N 10,95% (теоретически 11,21); .,53 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему);

1 - метил - 4 - нитро - 2 - пирролилкарбонил) - циклопептид А.

,81% (теоретически 13,87); ,84 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол 8: 2 по объему);

хлоргидрат (N - бeнзил-N-мeтил-a-мeтиoнил)-циклопептида А

N 11,62% (теоретически 11,38); 5 3,12% (теоретически 2,61); ,65 (снликагель, соотношение бутанол-1 : уксусная кислота : вода 4 : 1 : 5 по объему);

(N - бензилоксикарбонил - L - фенилглицил) - циклонептид А

N 11,11% (теоретически 11,42); К,- 0,85 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : 35 по объему);

хлоргидрат (N - гeкcил-N-мeтил-L-вaлил)циклопептида А

С (для основания) 63.45% (теоретически 63,40); Н (для основания) 9,12% (теоретически 9,24); N (для основания). 12,03% (теоретически 12,12); Rf 0,53 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему).

хлоргидрат (N - бензил - N - метил-Ь-аланил) - циклопентида А

N 12,20% (теоретически 11,98); С1 3,3% (теоретически 3,03); R/ 0,85 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : :35 по объему);

N - бeнзил-N-мeтил - L - фенилаланил)циклопептида А

N 11,50% (теоретически 11,58); R/ 0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему);

пальмитоил-циклопептид А

С 64,45% (теоретически 65,24); Н 9,41% (теоретически 9,51); ,30% (теоретически 10,53); R; 0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему);

ундеканоил-циклопептид А

С 64,78% (теоретически 64,0); ,28% (теоретически 9,21); ,9% (теоретически 11,18); R/ 0,52 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему);

додеканоил-циклопентид А

,1% (теоретически 11,05); Rf 0,78 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол 8: 2 по объему); (L (+) -6 метилоктаноил)-циклопептид А

С 63,63% (теоретически 63,41); Н 8,50% (теоретически 9,03); ,12% (теоретически 11,47); ,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему);

бензоил-циклопептид А

,88% (теоретически 11,86); ,85 (силикагель, хлористый этилен : метанол 65 : 35 по объему).

изоникотиноил-циклопептид А

,14% (теоретически 13,17); R/ 0,83 (силикагель, хлористый этилен : метанол 65:35 по объему);

Салицилоил-циклопептид А

,97% (теоретически 11,68); R/ 0,80 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол 65 : 35 по объему);

деканоил-циклопептид А

С 63,98% (теоретически 63,69); ,41% (теоретически 9,15); R/ 0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : : 35 по объему);

хлоргидрат - (N - гексил-Ь-валил)-циклопептида А

N (для основания) 12,25% (теоретически 12,27); R/ 0,37 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему);

(N - бензил-К-метил-Ь-лейцил) - циклопептида А

,99% (теоретически 11,91); ,72 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему);

(4 - параметоксибензилоксикарбониламино) - циклогексилкарбонил - циклопептид А,

,8% (теоретически 11,22); ,76 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 8 : 2 по объему);

(Ю-метил-З-фенотиазинил) - ацетил - циклопептид А

,3% (теоретически 11,56); 5 2,53% (теоретически 2,64); R/ 0,56 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол : 8 : 2 по объему);

2 - (3 - бензоилфенилпропионил) - циклопептид А

,45% (теоретически 10,55); ,57 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 8: 2 по объему);

(N,N - дигептилглицил) - циклопептид А ,43% (теоретически 11,56); ,76 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 8 : 2 по объему).

Пример 3. Растворяют 0,21 г N - третбутилоксикарбонил-Ь-валила в 25 мл хлористого метилена, к которому предварительно добавляют 0,14 мл триэтиламина. Охлаждают до -7°С и приливают 0,1 мл этилового эфира хлормуравьиной кислоты и перемешивают в течение 35 мин при -5°С. После этого приливают раствор 0,96 г циклопептида А в 10 мл хлористого метилена +0,14 мл триэтиламина. Вновь перемешивают в течение

18 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане. Выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Всего получается 0,97 г (N - грег-бутилоксикарбонил - L - валил)циклопептида А в виде сырца с выходом 84%.

Продукт растворяют в этилацетате. Раствор, фильтруют и промывают водой. После выпаривания досуха при 25 мм рт. ст. получают 0,73 г (N-г 5er-бyтилoкcикapбoнил - L - валил) - циклопептида А с выходом 63%.

N 11,7% (теоретически 12,1); R/ 0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 8 : 2 по объему).

Пример 4. Растворяют 1,43 ггептановой кислоты в 5 мл дИМетилформамида и добавляют 0,173 г N - оксисукцинимида. Охлаждают до -10°С, добавляют 0,31 т дициклогексилкарбомида, перемешивают 1 ч при 10, затем 2 ч при О и 18 ч при 20°С. Образовавшуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают, после чего приливают к фильтрату раствор 1,44 г щиклопептида А в 75 мл диметилформамида с добавкой 0,21 мл триэтиламина. Затем перемешивают 18 ч при 20°С. Реакционную среду выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Полученный остаток растворяют в 50 мл этилацетата и последовательно промывают водным 5 % -ным раствором двууглекислого натрия, 1 н. соляной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток хроматографируют с использованмем двадцатикратного веса силикагеля и с элюированием смесями хлороформа и метанола, в которых постепенно повышают содержание метанола. Гептаноилциклопептид А элюируют смесью хлороформом : метанол (98 :2).

Соответствуюш,ие фракции концентрируют досуха при 25 мм рт. ст.

Получают 0,92 г гептаноилциклопептида А с выходом 37 %.

,2% (теоретически 11,77); С 62,6% (теоретически 62,83); ,9% (теоретически 8,94), R/ 0,82 (силикагель, хлористый этилен : метанол 65 : 35).

Таким же образом, но с применением надлежащих веш,еств можно получить следуюшис продукты:

стеароилциклопептид А

,80% (теоретически 65,70); Н 9,60% (теоретически 9,62); Rf 0,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : : 35 по объему);

н-бутирилциклопептид А

С 60,9% (теоретически 61,9); Н 8,7% (теоретически 8,72); ,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65:35 по объему);

сорбоилциклопептид А

N 11,99% (теоретически 11,97); ,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 65 : 35 по объему);

хлоргидрат 11 - пирролидиноундеканоилциклопептида А

N 10,9% (теоретически 11,35); С1 2,05% (теоретически 2,87); ,60 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 65 : : 35 по объему);

хлоргидрат 2 - пирролидиногексаноил-циклопентида А

,81% (теоретически 12,05); ,,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 65 :35 по объему).

Пример 5. Растворяют 2,5 г Ь(+)-6-метилоктаноил - Na - бензилоксикарбонил-Ь-а-удиаминобутирил-Ь-треонил - N - бензилоксикарбонил - L - а - Y - диаминобутирилгидразида в 75 мл ледяной уксусной кислоты и 7,08 мл н. соляной кислоты. Охлаждают до 2°С и добавляют ледяной раствор 0,232 г азотистокислого натрия в 2,5 мл воды. Перемешивают 15 мин при 0°С и переливают в ампулу, также охлажденную до 0°С, после чего приливают 200 мл водного 5%-ного раствора двууглекислого натрия. Сливают органическую фазу и промывают ее пять раз последовательно с применением 60 мл ледяного 5%-ного раствора двууглекислого натрия. Промывные воды вновь экстрагируют 100мл ледяного этилацетата. Органические вытяжки промывают ледяным 5%-ным раствором двууглекислого натрия. Объединяют все органические вытяжки и высушивают их над безводным сернокислым натрием при О-2°С. Быстро фильтруют и приливают раствор L(+)-6-метилактаноил - NY - бензилоксикарбонил-Ь-а-7 - диаминобутирил - L -треонилN - бензилоксикарбонил-Ь-а-у-Диаминобутирилазида к ледяному раствору 3,23 г циклопептида А в смесь 100 мл этилацетата и 0,47 мл триэтиламина. Перемешивают в течение 18 ч при О-2°С и 48 ч при 20°С.

Полученный раствор выпаривают досуха при давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 100 мл воды, растирают до полного измельчения, отфильтровывают и сушат при пониженном давлении (0,3 мм рт. ст.) в присутствии пятиокиси фосфора. Полученный продукт растворяют в 20 мл ацетона, отфильтровывают небольшой осадок и выпаривают досуха при 20 мм рт. ст.

Таким образом получается 4,44 г L(+)6-метилоктаноил - -у - бензилоксикарбонил-Lа-7-диаминобутирил - L - треонил-М- -бензилоксикарбонил-L - а - Y - диаминобутирил циклопептида А с выходом 79%.

,54% (теоретически 11,75); R/ 0,92 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол 1 : 1 по объему).

Таким же образом, но с применением других необходимых исходных вешеств получают (Na-пальмитоил - N - е - бензилоксикарбоНИЛ - L - лизил) - циклопептид А.

,51% (теоретически 10,51); С 64,65% (теоретически 65,03); ,89% (теоретически 9,05); R/ 0,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол ; 8 : 2 по объе У

(Na - пeлapгoнил-N-s-бeнзилoкcикapбoнилL - лизил) - циклопептид А

,08 (теоретически 11,32); С 63,18% (теоретически 63,55); Н 8,41 (теоретически

8,66); ,59 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему);

(NV - пальминтол - N - v - бензилоксикарбонил - L - а - 7 - диаминобутирил)-циклопептид А

С 65,02% (теоретически 64,63); N 10,59% (теоретически 10,76); Н 8,82% (теоретически 8,95); ,68 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8 ;

:2 по объему);

(Na-L (+)-6-метилоктаноил - NV - бензилоксикарбонилдиаминобутирил) - циклопептид А

,13% (теоретически 11,56); С

63,00% (теоретически 63,08); Н 8,51%

(теоретически 8,55); ,55 (силикагель,

соотношение хлористый этилен : метанол

8:2 по объему);

Пример 6. Синтез проводят по примеру

4, используют следуюшие исходные продукты:

2,5 г L(+)-6-мeтилoктaнoил-N-v-бeнзилoксикарбонил-Ь-а-у-диаминобутирил - L - треонил - NY - бензилоксикарбонил-Ь-а-7-Диаминобутирилгидразида; 75 мл ледяной уксусной

кислоты; 7,08 мл 1 н. соляной кислоты; 232 мг азотистокислого натрия; 3,6 г (N-мeтил-L-вaлил) - циклопептида А в виде раствора в 2,5 мл воды, 100 мл этилацетата и 0,94 мл триэтиламина.

Получают 5,3 г Ь(+)-6-метилоктаноилNV - (бензилоксикарбонил-Ь-а-у-Диаминобутирил - L-треонил - N-Y-бензилоксикарбонилL-a-7-Диaминoбyтиpил-N-мeтил - L - валил)циклопептид А с выходом 87,5%. Продукт

очищают хроматографией на силикагеле, используя 50 г силикагеля на 5 г продукта, который элюируют в чистом виде этилацетатом и этилацетатом-метанолом, взятыми в отношении 9 : 1 по объему. Эта очистка дает возможность получить 2,81 г Ь(+)-6-метилоктанoил-N-v-бeнзoилoкcикapбoнил - L - а - v диаминобутирил - L - тpeoнил-N-v-бeнзoкcикарбонил-Ь-а-у-диаминобутирил - N - метилL - валил) - циклопептид А в хроматографически чистом виде с выходом 47%.

11

,79% (теоретически 11,79); R/ 0,31 (силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 8 : 2 по объему).

Таким же путем получают следующие продукты:

N - стеарил - L - валил (циклопептид А); ,46% (теоретически 10,58); Ry 0,45 (силикагель, соотношение хлористый метилен : метанол 8 : 2 по объему);

N - (стеаронл - N - метил-Ь-валил)-циклопентид А

,02% (теоретически 10,4); R/ 0,78 (силикагель, соотношение хлористый метилен : метанол 8 : 2 по объему).

Пример 7. Растворяют 2 г циклопептида А в 40 мл хлористого метилена и добавляют еще 0,28 мл триэтиламина. Смесь охлаждают до (-5) - (-10)°С, затем приливают в течение 10 мин одновременно два следующих раствора: 0,56 мл триэтиламина в растворе в 15 мл хлористого метилена и 0,684 г хлоргидрата 11-диэтиламино - ундецилового эфира хлормуравьиной кислоты. Перемешивают в течение 2 ч при 0°С и затем 18 ч при 20°С, промывают реакционную среду 5%-ным раствором двууглекислого натрия и затем насыщенным раствором поваренной соли. Высушивают над сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток хроматографируют на 25 г силикагеля, засыпанного в колонку диаметром 12 мм. Фракции элюируют смесями этилацегата : метанола, соотношение 98:2 и 95:5 по объему, объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 40 мл воды, добавляют по каплям н. соляную кислоту до . Отфильтровывают небольшой остаток и лиофилизуют фильтрат. Получают 1,24 г хлоргидрата 11-диэтиламиноундецилоксикарбонил - циклопептида А с выходом 50%.

,87% (теоретически 11,07); ,64 (силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 65 : 35).

Таким же образом получаются следующие соединения:

децилоксикарбонил - циклонептида А

С 63,50% (теоретически 63,08); N 11,95% (теоретически 11,03); Н 9,10% (теоретически 9,08); :R/ 0,85 (силикагель; соотношение хлористый этилен : метанол 8 : 2 по объему).

Смешивают 2,98 г циклопептида А, 0,569 г хлористого ортонитрофенилсульфенила и 0,42 мл триэтиламина в 40 мл этилацетата при 2°С. Перемешивают 18 ч при охлаждении в ледяной бане, после чего выпаривают досуха при давлении 22 мм рт. ст. Получают 3,45 г сырого продукта, который хроматографируют на силикагеле в колонке диаметром 20 мм. Фракции, элюированные этилацетатом, выпаривают досуха при 25 мм рт. ст. Получают 1 г ортонитрофенилсульфенилпиклопсптида А.

12

,1% (теоретически 12,6); 5 2,85% (теоретически 2,88); Ry 0,79 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему).

Таким же образом, из соответствующих исходных продуктов получают следующие соединения:

1 - диметиламинонафталинсульфонил - 5 циклопептид А

,66% (теоретически 11,75); 5 2,69% (теоретически 2,69); R/ 0,70% (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему); паратолуолсульфонилциклопептид А

,10% (теоретически 11,33); 5 2,56% (теоретически 2,88); ,74 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол 8:2 по объему);

нараацетиламинобензосульфонилциклопентид А

,71% (теоретически 12,12); 5 2,93% (теоретически 2,77); ,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол : 8 : 2 по объему).

Пример 8. Растворяют 863 мг Na-ацетилNs - бензилоксикарбонил - L - лизил)-циклопептида А в 25 мл метанола. Добавляют 863 мг палладиевой черни с 3% активного металла. Гидрируют при интенсивном перемешивании в течение 2 ч при 20°С и давлении 760 мм рт. ст.

Фильтруют полученный раствор и промывают осадок 10 мл 0,5 н. соляной кислоты.

Фильтрат и промывные воды объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. на вращающемся испарителе. Остаток растворяют в 5 мл ацетона и высаживают продукт 50 мл ледяного эфира. После охлаждения в течение 3 ч до 4°С отфильтровывают осадок, который промывают эфиром, высушивают 18 ч при давлении 0,3 мм рт. ст. в присутствии пятиокиси фосфора. Получается всего 0,46 г (Na aцeтилL-лизил) - циклопептида А с выходом 57,6%. ,0% (теоретически 13,23); (а 77,2 (,5 в метаноле); R/ 0,56 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол : 1 : :1).

Таким же образом получают следующие соединения:

метансульфонат L-валилциклопептида А ,83% (теоретически 12,14); ,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен :

метанол 65 : 35 по объему);

хлоргидрат L(+) - 6 - метилоктаноил-L-cc7-Диаминобутирил - L - треонил-Ь-а-у-диаминобутирил -циклопептида А. С1 5,08% (теоретически 4,81); R/ 0,14

(силикагель, соотношение хлористый этилен : : метанол 1 : 1 по объему);

хлоргидрат L(+) - 6 - метилоктаноил-L-a-у-диаминобутирил - L - треонил-Ь-а-у-Диаминобутирил - N - метил-Ь-валил-циклопептида А.