Штамм гриба м-45-продуцент пектолитических ферментов Советский патент 1976 года по МПК C12K1/00 C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиологической пpo /Iыuшeннocти, в частности к попучег-шю нового штамма - продуцента пектопитических ферментов, используемых в винодельческой, консервной и других отраслях промышленности.

Известны различные штаммы 1 рибов Asperg-iCEus , например AspergiflEus loetidus (исходный), продуцирзтощие ферменты пектолитического комплекса при поверхностном и глубинном способах культивироаания l.

Ферментативная активность известного штамма недостаточна для обеспечения биосинтеза пектолитических ферментов.

Цель изобретения - получение штамма плесневого граби AspergriEEus foeiidus , обладающего повышенной способностью к биосинтезу пектолитических ферментов при глубинном способе культивирования.

Штамм гриба Aspercr-f 6t s f oc-tidusM-45 выделен в результате ступенчатой селекции с применением мутагенных факторов химической природы, он хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов; регисграционный номер Т -81,

Морфологические признаки.

Ка морковном агаре мицелий сильно разве гв1;ен; наря. с тонкими гифами, встречаются более толстые с короткими клетками, стенки клеток мицепия прямые или слегка изанлистые. Около перегородок наблюдается утолщение клеток. Длина клеток мицелия варьирует от 7-27.5 до -15-55 мк Конидиеносцы прямые или слегка изогнутые, коричневые. Конидии круглые коричневые с толстыми шиповидными оболочками диаметром 3,75-5,50 мк,

Культуральные признаки.

На морковном агаре колонии круглые белые с глубокой радиальной извилистой складчатостью. Конидиеобразованне очень слабое. Диаметр гигантских колоний на 6 сутки роста достигает 70-75 мм.

На агаризованной среде Чапека С 6% хра мала и 1О% - ным экстрактом из солодовых ростков колонии белого цвета круглые плоские и только в центральной части слегка приподняты над субстратом с бугристой складчатостью. Остальная поверхность коло ний с извилистой радиальной складчатостью Конидиеобразование незначительное, едва заметное только в центре. Диаметр колоний на б сутки роста равен 53-55 мм, края их крупнозубчатые. На ломтиках картофеля рост хороший, складчатый, конидиеобразование слабое. Физиологические признаки. Мясо-пептонную желатину разжижает. Молоко не свертывает и не прптонизирует, нитраты восстанавливает. Крахмал гидролизу ет. Отношение к углеводам: глюкозу, галак тозу, ксилозу, мальтозу, а также маннит гидролизует с образованием щелочи. Сахаро зу, лактозу гидролизует, интенсивно подкисляя среду. Газообразование не наблюдается ни на одной из перечисленных сред. Получение активного штамма AspergriCfus loc-tidus М-45 проводят путем подготов ки материала для селекционной работы, выделения моноконидиальных культур исходного штамма AspefgriESos foe-tidus , изучения их естественной изменчивости по образованию ферментов и отбора лучших штаммов, которые служат затем исходными культурами для проведения последующих исследований. Затем осуществляют воздействие химическими мутагенами-нитрозосоединениями: нитрозометилмочевиной (НММ) и нитрозоме тилбиуретом (НМБ) на конидии отобранной моноконидиальной культуры из рассева исходного штамма AspergrieCus foctidus , выделяют большое количество вариантов и осу ществляют рассев лучшего мутанта. Новый штамм A&perg-i6fiy§ foeiid(JSM-45 выделяют после обработки конидий исходного штамма 0,1%-ной нитрозометилмочевиной в течение 2 час. Активный штамм AspepfftfCus foe-ti3usM-4 подвергают проверке по ферментативной активности при хранении в пересевах на агаризованной питательной среде состава,%: глюкоза 2,0, аммоний азотнокислый 0,3, калий фосфорнокислый однозамещенный 0,1, магний сернокислый 0,1, железа сернокислое следы; морковь 50,0; агар-агар 20, Культивирование штамма в глубинных усло виях проводят на жидкой среде состава,%: экстракт из свекловичного жома 89,15; вытяжка из солодовых ростков 10,0; аммоний сернокислый 0,7; калий фосфорнокислый однозамещенный О,1О; магний сернокислый 0,О5; рН среды .4,1-4,3. Рост штамма гриба Asperg-iEEus fo-aiidus М-45 на указанной среде в условиях глубин ного культивирования на качалке при 180 об/мин и 30°С интенсивный, имеет вид густой мелкозернистой, кашицеобразной массы. Максимальное образование пектолитических ферментов в культуральной жидкости наблюдается после 66 час выращивания. Показатели пектолитической активности {пектиностеразной и полигалактуразной) определяют интероферометрическим методом, при этом они составляют 1,4-1,6 ед/мл культуральной жидкости, а показатели активности исходного штамма не превышают 0,70,75 ед/мл. Проведенными в течение двух лет исследованиями установили, что при хранении и пассировании на морковном агаре высокий уровень ферментативной активности штамма AspepgrifCus foe-tidus М-45 не снижается. Таким образом, предлагаемый штамм по сравнению с исходной культурой обладает преимуществами, заключающимися в усиленной способности к биосинтезу пектолитичесжого комплекса ферментов, и представляет собой новую ценную культуру со стойкими, наследственно закрепленными биохимическими свойствами. Формула изобретения Штамм гриба Aspepcri fos &clidusM-45 продуцент пектолитических ферментов, хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов. Регистрационный номер Т- 81. Морфологические признаки. На морковном агаре мицелий сильно разветвлен; наряду с тонкими гифами, встречаются более толстые с короткими клеткакге. стенки клеток мицелия прямые или слегка .извилистые. Около перегородок наблюдается утолщение клеток. Длина клеток мицелия варьирует от 7-27,5 до 15-55 мк. Конидиеносцы прямые или слегка изогнутые коричневые. Конидии круглые коричневые с толстыми шиповидными оболочками диаметром 6,75-5,50 мк. Культуральные признаки. На морковном агаре колонии круглые белые с глубокой радиальной извилистой складчатостью. Конидиеобразование очень слабое. Диаметр гигантских колоний на 6 сутки роста достигает 70-75 мм. На агаризованной среде Чапека С 6% крах мала и 10%-ным экстрактом из солодовых ростков колонии белого цвета, круглые плоские и только в центральной части слегка приподняты над субстратом с бугристой скпадч-атостью. Остальная поверхность колоний с извилистой радиальной складчатостью. Конидиеобразование незначительное, едва заметное только в центре. Диаметр колоний на 6 сутки роста равен 53-55 мм, края их крупнозубчатые. На ломтиках картофеля рост хороший, складчатый, конидиеобразование слабое. Физиологические признаки. Мясо-пептонную желатину разжижает. Молоко не свертывает и не пептонизирует, нитраты восстанавливает, крахмал гидролизует. Отношение к углеводам: глюкозу, галактозу, ксилозу, мальтозу, а также маннит гидролизует с образованием щелочи. Сахарозу, лактозу гидролизует, интенсивно подкисЬяя среду, ; Газообразования не наблюдается ни на одной из перечисленных сред. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Лосякова Л.С., Руденко Т.П., Струнникова Т.Р., Синякина А.А. Статья Изучение условий биосинтеза пектологических ферментов плесневым грибом AspewECus foeiidus в трудах ферментного отделения. Вып. 1. Ферменты, получение и применение в пищевой промышленности, изд. 1972 - прототип.