Штамм дрожжеподобного гриба -55-13 продуцент глюкоамилазы Советский патент 1976 года по МПК C12K1/00 C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к получению нового штамма дрожжей, используемого для образования фермента глюкоамилазы, например, в производстве сппртов.

Известны различные штаммы дрожжеподобного гриба Endomycopsis iibuliger, используемые для образования фермента глюкоамилазы 1.

Известные штаммы дрожжеподобного гриба имеют невысокую глюкоамилазную активность, что не позволяет пнтенсифиц 1ровать пропесс производства и увеличить выход продукта.

Цель изобретения - иолучение нового штамма со стойкими бно.химическимп свойства.ми, обладаюшего высокой способностью бпосиитеза глюкоамилазы, а следовательно, увеличение выхода продукцпи п интенсификапня процесса производства.

Штамм д)ожжеподобного гриба Endomycopsi iibuliger 55-13 - продуцент глюкоамилазы выделен в результате трехкратного комбиппроианиого возде 1ствия мутагена этиленимина ко1п;,ентрацией 1 : 2000 в течение 30 мин и ультрафиолетовы. лучей в дозе 4,OXiO эрг/мм -- на иервой ступени п 2,0X10 эрг/мм- па второй п третьей ступенях селекци.

2

Морфологические признак и.

На солодовом сусле при 30°С 48-часовая культура образует дрожжевые клетки в осиовиом овальной формы и реже округлые, размером 1,75-5,5X2,0-3,5, в среднем 4,95Х Х2,7 мкм. В большом количестве образуются сеитпрованные разветвленные гифы диаметром 1,5-2,5, в среднем 2,05 мкм.

На синтетической среде форма клеток такая же, как на солодовом сусле. Размер клеток 2,5-6,25X1,5-3,75, .в среднем 3,75Х Х2,67 мкм. Гифы диаметром 2,5-3,25, в среднем 2,75 мкм.

При глубинном культнвировании в течение 76 ч в условиях интенсивной аэрации полностью исчезают гифы мицелия, остаются дрол жевые клетки более мелкие.

К у л ь т у р а л ь н ы е приз н а к и.

Рост на жпдкпх средах.

На солодовом сусле через 48 ч при 30°С образуется кольцо. Через 3-5 дней образуется толстая плепка, покрывающая всю поверхность. На дне пробирки осадок мицелпя в виде пуха. Без взбалтывания среда прозрачная.

На спптетической среде кольцо выражено ярче 11 среда мутная без взбалтываипя.

Рост иа твердых средах.

Носев п трпхом на сусло-агаре.

Рост мощный, белый, плотный, тусклый, вынуклый. Поверхность мучнистая. Край мелковолнистый, ворсистый.

На синтетнческой среде - рост такой же, как на сусло-агаре, край мелко-волнистый, ворсистый с выиуклостыо.

lioceB уколом на солодовом агаре.

Рост на поверхности укола средний, белый, тусклый. По уколу слабый, ветвистый с разрывом среды с газообразованием.

Гигантская колоння через 7 дней при 20- иа солодовом агаре - круглая, белая, диаметром 12-13 мм, тусклая, слегка вынуклая, край ровный, ворсистый, иоверхность мучнистая, b цеитре колонии кратер диаметром 3-4 мм, окруженный небольшим валиком диаметром 0,5 мм. В кратере иоверхность мелко-комковатая. Имеются два концентрических круга.

На синтетической среде колония круглая, более мелкая, диаметром И -12 мм, тусклая, белая, слегка выпуклая. В центре колонии площадка диаметром 5 мм с иебольщим углубленпем. Поверхность мучнистая с выраженным концентрическим кругом. Край ровный, ворсистый с ростовой каемкой 0,5 мм.

Б и о X и м и ч е с к и е и р и знак и.

Гидролизует крахмал, нитраты не восстанавливает, молоко свертывает и иептопизирует, желатину разжнжает слабо.

Отношение к азоту. Используют иептон, мочевину, слабее аспарагин, азотнокислый кальций. Не усваивает сернокислый аммоний.

Отношение к источникам углерода. Использует с выделением газа сахарозу, глЮКозу, мальтозу, слабее усваивает арабинозу, лактозу и галактозу. Не использует органические кислоты и маннит.

Оитимальная темнература для биосинтеза глюкоамилазы и рН 5,5.

Штамм дрожженодобного гриба Endomycopsis fibuliger 55-13 испытан по ферментативной активности в процессе хранения и пассирования па среде, состава, %; крахмал картофельный (растворимый) 1,0; кукурузный экстракт 1,0; глюкоза 0,5, мопофосфат калия 0,5 и агар-агар 2,0.

Для глубинного культивирования используют такую же среду, по вместо картофельпого растворимого крахмала берут кукурузный нативный крахмал.

Рост штамма дрожженодобпого гриба Endomycopsis libnliger 55-13 в условиях глубинного культивирования па качалке ирн 180 об/мин и ЗОС интенсивен, кашицеобразен.

.Максимальное образойапие тлюкоа милазы в культуральной жидкостн наблюдается на вторые-третьи сутки выращивапия.

При нассировании и храпеиии высокий уровень ферментативной активности штамма Епdomycopsis fibuliger 55-13 не спи/кается.

Глюкоамнлазную активность определяли глюкозооксидатным методом.

Результаты показывают, что активность мутанта Endoraycopsis fibuiiger 55-13 на указанной среде составляет 14,0-16,0 мкм/мл-мин, т. е. в 10-14 раз больше, чем у нсходного штамма, при этом наиболее высокая активпость глюкоамплазы наблюдается в кислой

зопе ирп рН 5,5.

Таким образом, актпвпость глюкоамилазы штамма дрожжеиодобного гриба Endomycopsis fibuhger 55-13 - иродуцеита глюкоамилазы превышает глюкоамилазную активность

известиого штамма и представляет собой новую культуру со стойкнмн биохимическими свойствами, заключающимися в усиленной снособностн к биосинтезу глюкоамилазы.

Ф о р м у л а изобретения

Штамм дрожженодобного гриба Endomycopsis fibuliger 55-13 - нродуцент глюкоамилазы.

Морфологнческие нризнаки. На солодовом сусле нрн 30°С 48-часовая культура образует дрон жевые клетки в основном овальной формы и реже округлые, размером 1,75-5,5X2,0-3,5, в среднем 4,95Х Х2,7 мкм. В большом количестве образуются сентпрованные разветвленные гифы диаметром 1,5-2,5, в среднем 2,05 мкм. На синтетической среде форма клеток такая же, как на солодовом сусле. Размер клеток 2,5-6,25Х XI,5-3,75, в среднем 3,75X2,67 мкм. Гифы диаметром 2,5-3,25, в среднем 2,75 мкм.

Нри глубинном культивировании в течение 76 ч в условиях интенсивной аэрации полностью исчезают гнфы мпцелия, остаются дрожжевые клетки более мелкие.

К у л ь т у р а л ь н ы е признаки. Рост па жидких средах.

На солодовом сусле через 48 ч при 30°С образуется кольцо. Через 3-5 дней образуется толстая пленка, покрывающая всю поверхность. На дне нробирки осадок мпцелия в виде пуха. Без взбалтывап ш среда прозрачпая. На спптетпческой среде кольцо выражеио ярче и среда мутная без взбалтывания. Рост па твердых средах.

Посев штрпхом па сусло-агаре. Рост мош1 ьш, белый, нлотный, тусклый, выпуклый. Поверхность мучнистая. Край мелко-волнистый, ворсистый.

На сиитетической среде - рост такой же, как на 1сусло-агаре, край мелко-волнистый, ворсистый с выпуклостью.

Посев уколом на солодовом агаре. Рост на иоверхности укола средний, белый, тусклый. По уколу слабый, ветвистый с разрывом среды с газообразованнем. Гпгаптская колопия через 7 дней при 20-22°С па солодовом агаре - круглая, белая, диаметром 12-13 мм, тусклая, слегка выпуклая, край ровпый, ворсистый, поверхность мучнистая. В центре колонии кратер диаметром 3-4 мм, окруженный небольшим валиком диамет)ом 0,5 мм. В кратере поверхность мелко-комковатая. Имеются два концентрических круга.

На синтетической среде колония круглая, более мелкая, днаметро.м II -12 мм, тусклая, белая, слегка выпуклая. В центре колонии площадка диаметром 5 мм с небольшим углублением. Поверхность мучнистая с выраженным концентрическим кругом. Край ровный, ворсистый с ростовой каемкой 0,5 мм.

Б и о X и .м и ч е с к и е признак и.

Гидролизует крахмал, нитраты не восстанавливает, молоко свертывает и пентонизирует, желатину разжижает слабо.

Отношение к азоту. Использует пептон, мочевину, слабее аспарагин, азотнокислый кальUiifi. Не усваивает сернокислый аммоний.

Отношенне к источникам углерода.

Использует с выделением газа сахарозу, глюкозу, мальтозу, слабее усваивает арабинозу, лактозу и галактозу. Не использует органические кислоты и маннит.

Оптимальная температура для биосннтеза глюкоамилазы 30°С и рН 5,5.

Источник информации, принятый во внимание ири зкспертизе:

1. Авторское свидетельство ЛЬ 340690, М. Кл. С 12D 13/10. 1972.