Штамм 147-а -продуцент кислотоустойчивой -амилазы и глюкоамилазы Советский патент 1979 года по МПК C12K1/02 C12D13/10 

Полученный штамм имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристики Морфология, У пятисуточной культуры гифы тонкие и толстые,разделенные на рг1вные прямоугольные клетки„ Конидиеносцы бесцветные, несептированные, неветвящиеся размером (330--858) х (6 , б.-13,2),мк, средний их размер ббОх х9,9 мк. Конидиальные головки радиальные. Конидиальные пузырьки круглой формы диаметром 26,4-66,0 мк, средний диаметр 46,2 мк. Стеригмы цилиндрические, двурядные, причем первичные -длиннее вторичных. Размер стеригм первого поря ка 13, 2--19, 8 мк , в/среднем 15,2 мк, Стеригмы второго порядка размером 4,0-9,9 мк, в среднем 6,6 мк. На стеригмах расположены конидии круглые, диаметром 4,6-11,5 мк, сре ний диаметр 6,6 мк« Органическая среда. Пятисуточная гигантская колония п-Лоская круглая, диаметром 9-10.см Конидиальные головки крупные в цент ре колонии, мелкие по краю Конидке ношение обильное светло-коричиевое. Стерильный край, колоний 0,5-1,0 см. Минеральная среда {г/п}: NaNO,- 4,0; KHjPO - 1,0 крахмал - 20,0; пшеничные отруби -4 Рост колоний в виде гомогенной каши цеобразной массы светло-коричневато цвета. Отношение к источникам углерода Гидролизует амилозу, амилопектин и лодобные поли- и олигосахариды с №-1,6 глюкановой связью. Наблюдает ся интенсивный рост на среде, содер жащей 1люкозу, сахарозу и мальтозу в ка естве единственного источника углерода. отношение к источ-ника - азота, АЗОТ, нитрата усваивает легче, чем азот аммония. Наиболее интенск ный рост наблюдается на нитратах. Отюшение к источь;икам фосфора. Усваивает разнообразные фосфорные оединения, в том числе и в трехалентной форме. На среде, содержащей крахмал в качестве источника углерода, синтезирует кислотоустойчивую сб -амилазу и глгокоамилазу, в этих же условиях протеолитические ферменты синтезируются в следовых количествах. Активность по кислотоустойчивой о{. -амилазе - 1,5 ед/мл, по глюкоамилазе - 12,1 ед/м.п. П р и м е р 1, Штамм AsperdiEEus n-idep 147--А получен путем облучения ультрафиолетовыми лучами Б дозе 3,2х X Ю эрг/см конидий исходного штаммаAsper iEEusni er 475. Культивирование мутанта проводили на среде следую це:го состава (г/л) : NaNOj4,0 КНрРО 1,0 Mg604 0,5 Крахмал 20,0 Пшеничные отруби4,0 при 30°С на качалке (180 об/мин) в течение 72 час. Посевныг.1 материалом служила суспензия конидий грибов, выращенных на скошенном сусло-агаре в течение 20 суток. Грибы культивировали в колбах объемом 750 мл, содержащих 150 мл среды. Параллельно выращивали AsperdiEEus 475. Данные лабораторной проверки культуральной жидкости на активность ферментов амилолитического комплекса нами полученного штамма , в сравнении с известньач Aspergi €us niger 475 приведены в табл. 1. АКТИВНОСТЬ об -амилазы определяли колориметрическим методом Рухлядевой и Горячевой. Активнасть глюкоамилазы-определяли по ДальквисТ.У, а об активности трансглюкозилазы судили по способности фермента образовывать олигосахара из мальтозы (наличие на хроматограмме пятна изомальтозы и Пановы),

AspergiEBus niger 1,512,1

Aspev 6iEeu6 niger 4750,6512,0

Т а б л и ц а 1

нет

есть Как видно из таблицЕЛ, полученный штамг/1 AspergiEEus njger 147-А, отличающийся от Asper tEEus nider 475 по морфологическим и биохимическим признакам, .обеспечивает повышенную активность кислотоустойчивой об -ами лазы, а также отсутствие нежелатель ного фермента траксглюкозилазы. Кислотоустойчивую об -амилазу с успехом можно использовать в тех отраслях пищевой промьяиленности и медицины, где процесс прш.5енения фермента сопряжен с кислым значение рН среды, например, в клебопекарной промьшленности, когда при внесении жидких дрожжей рН среды резко падает. Использование указанного штамма будет эффективно также в спиртовой про / ышленности. При энзимотерапии важную роль играет кислотность желудочного сока подавляющего активность ферментов, в этих условиях кислотонеустойчи вая (и -амилаза полностью теряет активность, в то время как ккслотоустойчивая с6 -амилаза со храняет бол 90% энзиматической активности, Пример2. 8мг ферментного препарата кислотоустойчивой ой По предлагаемому

способу:

препарат из КЖ AspenoiEBus nioen 147-А

По прототипу: амилоризин П10Х

Контрольный вариант

Хлеб выпеченный с добавлением ферментного препарата кислотоустойчивой ci -амилазы и глюкоамилазы из Aspergi&Eus 147-А, отличается лучшими вкусовыми качествами, более замедленным процессом черствения и более равномерной структурой пористости.

Формула изобретения

Штамм AspergiBSus продуцент кислотоустойчивой «, -лмила535

508

2,15

10

470

2,36

зы и глюкоаьжлаэы. Хранится в музее коллекции культур Института биохимии растений АН Грузинской СССР. Морфологичебкие признаки, У пятисуточной культуры гкфы тонкие и толстые, разделенные на равные прямоугольные клетки. Кон}здиеносцы бесцветные, несептированные, невет вящиеся, размером (330-8Ь8)х(6,б13,2)мк, средний размер 660x9,9 мк. Конидиалькые головки радиальные. 17 амилазы и глгокоамилазы Asper iPPiis 147-А, полученного осаждением эти- ловыг 1 спиртом, с aicTHBHocTbro кислотоустойчивой oL: -амилазы-250 ед/г и глюкоамилазы-840 ед/г вместе с 415 мл воды, 10 г хлористого натрия и 20 г дрожжей интенсивно перемешивают с 740 г муки первого сорта до получения однородного теста, затем ставят в термостат () на два чао (перемешивают тесто через каждьзй -iac) . Полученное таким образом тесто делят на две части и выпекают формовой и подовой хлеб Параллельно в аналогичных условнях выпекают хлеб с добавлением амилоризина П-ЮХ-ферментного препа™ ратау который в настоящее время применяется в СССР как добавка с целью улучшения качества хлебобулочных изделий,и контрольный варинт - без добавления ферментного препарата, В табл,2 приводятся данные использования ферментных препаратов кислотоустойчивой об -амилазы и глюкоамилазы Asper SBus niger 147-А амилоркзина- ПЮХ и контрольного варианта (без внесения фермента), Конидиальные пузырьки круглой формы диаметром 26,4-66,0 мк, средний диаметр 46,2 мк. Стеригмы цилиндрические, двурядные, причем первичные длиннее вторичных. Размер стеригм первого порядка 13/2-19,7мк, в среднем 15,2м Стеригмы второго порядка размеро 4,6-9,9 мк ;в среднем6,6 мк. На стеригмах расположены конидии круглые, диаметром 4,6-11,5 мк, средний диаметр 6,6 мк. Культуральные признаки. Органическая среда. Пятисуточная колония плоская, круглая, диаметром 9-10 см. Конидиальные головки крупные в центре колонии, мелкие по краю. Конидиеношение обильное светлокоричневое. Стерильный край колоний О,5-1,О см. Минеральная среда (г/л): NoN03-4,0; KHjPqj - 1,Q-, М 50 крахмал - 20,0; пшеничные отруби 4%. Рост колоний в виде гомогенной кашицеобразной массы светло-коричне го цвета. Отношение к источникам углерода Гидролизует амилозу, амилопектин и 8 подобные поли- и олигосахарилы с Л- 1,6 глюкановой связью. Наблюдается интенсивный рост на среде, содержащей глюкозу или сахарозу или мальтозу в качестве единственного источника углерода. Отношение к источникам азота. АЗОТ нитрата усваивает легче, чем азот аммония. Интенсивный рост наблюдается при использовании нитратов . Отношение к источникам фосфора. Усваивает фосфорные соединения. На среде,содержащей крахмал в качестве источника углерода, синтезирует кислотоустойчивую сО -амилазу и глюкоамилазу, в этих же условиях протеолитические ферменть синтезируются в следовых количествах. Предложенный штамм характеризуется повышенной активностью, а также отсутствием нежелательного фермента трансглюкозилазы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Прикладная биохимия и микро1975, т,Х1, вып.4. биология