Способ получения -1,6-глюкозидазы Советский патент 1977 года по МПК C12D13/10 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ а-1,6-ГЛЮКОЗИДАЗЫ

1

Изобретение относится к области ферментативного гидролиза крахмала, гликогена, декстрана и подобных веществ, а именно к способам получения а-1,6-глюкозндазы, характеризующейся относительно высокой активностью, проявляющейся нри температуре незначительно превышающей 45°С.

Известен способ получения а-1,6-глюкозидазы путем культивировання ее продуцентов, а нменно Pseudomonas amyloderamosa SB-15 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли 1.

С целью расширения ассортимента иродуцентов а-1,6-глюкозидазы согласно предлагаемому способу в качестве последнпх используют щтамм Nocardia corallina IFO3338.

Этот штамм обладает способностью продуцировать а-1,6-глюкозидазу больше во внешней среде, окружающей клетку, чем в самнх клетках. Штамм выделен из ночвы, идентификацию его осун1,ествлял11 по справочнику Bergeys Manual of Determinative Bacteriology (седьмое издание).

Штамм Nocardia corallina IFO 3338 характеризуется следующими морфологическими и культуральными нризнаками.

Разветвляющиеся палочки в основном загнуты, 1,0-1,5:3,0-10,0 мкм. После сравннтельно длительного процесса выращивания (т. е. старые культуры) клетки имеют форму более коротких палочек и кокков.

Клетки неподвпжные, некислотоустойчивые, грам-положительные. Па желатине колонни круглые, выпуклые, гладкие, розовые, блестящие. Край колоний ннтевидный. После выращивания в столбике желатины клетки имеют форму шляпкп гвоздя, древовпдные. Разжижения не наблюдается.

На агаре колонии круглые, выиуклые, имеют закругленный выступ, гладкие, розовые, блестящне нлн матовые, край более светлый, нптевпдный или с древов дными выступами. В раннпх стадиях развития колонии состоят из разветвляющихся нитевидных палочек. По мере роста колоний клетки разрываются внутри на короткне палочки, а снаружи остаются нитевпднымн.

Па скошенном агаре колонии нитчатые, выпуклые, гладкие, розовые, блестящие или матовые. Рост древовидный или с выступами. Па лакмусовом молоке реакция щелочная; красноватая пелликула. Па картофельном агаре с глицерином колонии нитчатые, сухие, морщииистые, от желтовато-коричневого до кораллового цвета.

На яичной среде по Дорсету колонии нитчатые, сухие, морщинистые, оранжевого цвета.

На среде ио Лиффлеру рост колоний аналогичен росту на яичной среде но Дорсеру, но розовый.

Сахарозу, мальтозу и лактозу не сбраживает.

Оптимальная температура между 22 и 25°С. Оптнмальное значение рН между 6,8 и 8,0.

Пример 1. Получение а-1,6-глгокозидазы прн помощи щтамма Nocardia corallina IFO 3338.

Штамм Nocardia corallina IFO 3338 вносят в 100 мл культуральной среды, содержащей (%): пептон 1,0; дрожжевой экстракт 0,5; К2НРО4 0,1; NaCl 0,1; MgSOi-THsO 0,05; FeSO4-7H2O 0,001; разжиженный крахмал 1,4. Процесс осуществляют 4 дня при 30°С и неремещиванни.

Внеклеточная энзнматическая активность штамма 24,6, внутриклеточная 1,6, общая 26,2; рП среды 7,6.

П р и мер 2. В 1 л культуральной среды, аналогичной но составу среде в примере 1, вносят штамм Nocardia corallina IFO 3338 и осуществляют нроцесс культивирования 3 дня нрн 30°С, перемещивании и рН 7,4.

Внеклеточная энзнматическая активность щтамма 34, внутриклеточная 16, общая 50.

Сливают надосадочную жидкость, насыщают ее сульфатом аммоння до получения 0,8 насыщенного раствора. Выпавшнй осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде, нерастворнвшнеся примеси удаляют, раствор насыщают сульфатом аммония (до получення 0,8 насыщенного раствора), высаливают и диализуют.

Получают раствор энзима. Оптимум рН раствора 6-7, оптимальная температура 42- 46°С. При повышении темнературы до 50°С активность энзима падает. Энзим не гндролизует декстрин.

Формула изобретення

Способ получения а-1,6-глюкозндазы путем культивирования ее продуцентов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью расширения ассортимента продуцентов, в качестве продуцента используют штамм Nocardia corallina IFO 3338.

Источиикн информании, нринятые во внимание при экспертизе:

1. Патент СССР № 290542, кл. С 12d 13/10, 1971.