Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR-источник умеренного фага ХШ серовара УП гетероиммунной категории Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N7/00 C12N1/20 C12R1/63 

1

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при эпидемиологическом обследовании при холере методом фаго- типИрования.

Штамм Vibrio cholerae eltor 893 несет фаг не описанной ранее VII гетероиммунной категории 893, отличающийся от фагов 1,11,III,IV,V и VI гетероиммунных категорий спецификой иммунитета.

Штамм № 893 дикий. Депонирован под номером КМ-18(893) и характеризуется следую1чими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,4-2,9 мкм в длину и 0,3- 0,6 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует, грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера рН 7,6-0,2) образуют через 18 ч выращивания при 37+1 С круглые, диаметром

10

15

20

3,0-0,4 мм полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром. На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1%-ная пептонная вода, бульон Хоттингера, рН 7,8+0,2) через 6 ч выращивания при 37+1°С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности.

Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен, разлагает до кислоты без газа маннозу, глюкозу, сахарозу, манннт, не разлагает арабинозу, инозит, лактозу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона; ферментирует крахмал и желатину; не образует дигндро- лазу аргинина и декарбоксилазы лизина и орнитина, не растет при повышенной (7-10%) концентрации хлорида натрия, гемолизирует эритроциты барана по Грейгу.

Серологические свойства. Агглютинируется до титра холерными сыворот(Л

4ib

сд

4

00

4

СО

1454849

ками О и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками R. О и Инаба. Спонтанно продуцирует умеренный фаг 893 ранее неизвестной VII гете- роиммунной категории, которыйлизиру- ет культуры холерных вибрионов, ли- зогенные по фагам I-VI категорий, и при лизогенизации чувствительной ,культуры холерных вибрионов создает у нее иммунитет (резистентность) только к фагам своей иммунной категории, не создает иммунитета к фагам I-VI иммунных категорий. Фаг 893 используют при получении специфической тест-культуры МЕ-7/893, применяемой для прямого фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биовара при проведении эпидемиологического анализа.

Умеренный фаг 893 по электронно- микроскопической структуре относится к II морфологической группе по классификации А.С. Тихоненко по серологическим свойствам принадлежит к нее не описанному XIII серотипу хо- лерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae elcor 570 образует типичные колонии с прозрачным центром, окруженным узкой зоной неполного лизиса 1,0+0,5 мм в диаметре.

Размножают штамм 893 на бульоне и агаре Мартена, рН 7,6+0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

Пример. Для получения спе- . цифической тест-культуры МЕ-7/893 готовят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37°С штамма 893 и в-количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста индикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0,77о-ного агара

10

15

го до ), перемеш ют на 2%-ную агаровую чашке Петри, дают зас руют 18 ч при . П чашек отбирают одну ную колонию фага. Ук иглы в центр колонии в 10 пробирок с 1,0 же добавляют индикат и 0,7%-ный агар, как Содержимое каждой пр на отдельную агарову инкубируют 18 ч при в каждую чашку добав бульона и шпателем пер ним агаровым слоем, реносят во флакон и указано вьшле. Получе рованный фаг 893 (10 в 1 мл) в количестве с О,2-мл реципиентно добавляют 0,7%-ный а на агаровую пластинк

25 инкубирования при 37 ти реципиентного шта единичные негативные цированного фага 893 рых высевают клоны,

30 фагу 893 (МЕ-7/893)

Применение штамм eltor и полученного лизогенного клона М тест-культуры при ф холерньпс вибрионов эпидемиологических

холере.

20

40

Формула из

Штамм бактерий V eltor KM-18(893) ного фага XIII серо

штамма j/u и -,- , ,.,,

Мартена (расплавленного и охлажденно- 45. иммунной категории,

5

го до ), перемешивают и выливают на 2%-ную агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть и инкубируют 18 ч при . При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в центр колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона. Туда же добавляют индикаторный штамм 570 и 0,7%-ный агар, как указано выше. Содержимое каждой пробирки выливают на отдельную агаровую пластинку и инкубируют 18 ч при , после чего в каждую чашку добавляют по 10 мл, бульона и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть пе - реносят во флакон и фильтруют, как указано вьшле. Полученный концентрированный фаг 893 (10-10 корпускул в 1 мл) в количестве 1,0 мл соединяют с О,2-мл реципиентного штамма МЕ-7, добавляют 0,7%-ный агар и выливают на агаровую пластинку. Через 18 ч

5 инкубирования при 37°С на поверхности реципиентного штамма обнаруживают единичные негативные колонии модифицированного фага 893, из центра которых высевают клоны, лизогенные по

30 фагу 893 (МЕ-7/893).

Применение штамма 893 V.cholerae eltor и полученного с его помощью лизогенного клона МЕ-7/893 в качестве тест-культуры при фаготипировании холерньпс вибрионов повьш1ает точность эпидемиологических исследований при

холере.

0

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor KM-18(893) источник умеренного фага XIII серовара VII гетеро „,.,,

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при эпидемиологическом обследовании при холере. Штамм Vibrio cholerae eltor 893 дикий, депонирован под номером КМ-18(893), Путем искусственной лизогенизации ре- ципиентного штамма с использованием штамма 893 получают новую тест-культуру, которую используют при фаготи- пировании холерных вибрионов. Штамм продуцирует фаг XIII серовара VII гетероиммунной категории.