Штамм N563 ,используемый для выявления лизогенных штаммов молочнокислых стрептококков Советский патент 1980 года по МПК C12K1/02 A23C19/02 

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ед/мл.

При посеве в молоко 1% 18-ти часовой бульонной культуры сгусток образуется за 16-18 ч. Сгусток плотнйй, равномерный, консистенция колющая ся,

При посеве уколом в мясопептонную желатину слабый рост по линии укола. Разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролизованного молока в чашки Петри через два дня образуются гладкие, круглые белые, блестящие, с ровным краем колонии. Размер колоний 1,0-1,2 мм. Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в среде до 1000 ед/мл.

Отношение к углеродам. Сбраживает глюкозу, галактозу, лактозу,мальтозу с образованием кислоты. Маннит не сбраживает.

Штамм streptococcus diacetlCoctis 563-Sможет быть легко идантифицирован и выделен при определении чувствительности штаммов молочнокислых стрептококков к бактериофагам, при этом штамм Str. d oceti actis , 563- S чувствителен ко всем 10 умеренным бактериофагам.

Для повышения частоты г- тации штамм Str. 1 № 563 облучают ультрафиолетом, после чего проводят отбор стрептомицин-резистентных мутантов, в результате чего определяют штамм sxr. diiaceV№oct e., № 563-S, обладающий фазочувствительностью штамма дикого типа.

Выявление лизогенности штаммов молочнокислых стрептококков с помощью штамма S4r. divaceX e. .№ 563-S проводят следующим образом.

Исследуемый на лизогенность шт.амм молочнокислых стрептококков .пересевают перед Опытом с чашки Петри (6-8 колоний) в бульон из гидролизованного молока и инкубируют 18 ч. О,1 мл 18-ти часовой бул1зонной культуры пересевают в 10 мл стерильного бульона и культивируют при 5ч.

Индикаторный штамм sir. otiacetifcactis

№ 563-S пересевают с чашек Петри (6-8 колоний) в бульон из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина и инкубируют 18 ч. / 0,1 мл 18-ти часовой культуры переносят :в 10 МП стерильного бульона со стрептомицином (200 ЕД/мл) и инкубируют 5 ч при 30°С,

За 4-5 ч до постановки опыта в чашки Петри разливают по 25-30 мл 1,5%-ного агара из гк:,аролизованного молока, содержащего 200 ЕД/мл стрептомицина. После застывания агара чашки подсушивают 3-4 ч. В пробирки предварительно разливают по 2 мл

0,6%-ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина. Перед использованием пробирки подогревают в водяной бане при до расплавления агара и охлаждают до 45°С. Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл 5-ти часовых культур индикаторного и исследуемого иггамма, содержимое пробирки быстро перемешивают и выливают на поверхность 1,5%-ного агара из гидролизованного молока со стрептомицином в чашки Петри с одновременным равномерным распределением и последующим выдерживанием до застывания верхнего слоя.

Опыт проводили с двумя контролями:

1.В пробирку с расплавленным и охлажденным до 45°С 0,6%-ным агаром из гидролизованного молока с

200 ЕД/мл стрептомицина вносят 1 мл 5-ти часовой индикаторной культуры, содержимое пробирки выливают на 1,5%-ный агар из гидролизованного молока со стрептомицином 200 ЕД/мл в чашки Петри.

2.В пробирку с расплавленным и

охлажденным до 45°С 0,6%-ным агаром из г идролизованного молока (200 ЕД/мл стрептомицина) вносят 1 мл 5-ти часовой культуры испытываемого на лизогенность штамма, и содержимое пробирки выливают на поверхность 1,5%-ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина.

Опытные и контрольные чашки инкубируют при 30°С 18 ч. В контрольной чашке с посевом индикаторного штамма должен образоваться мутный бактерисшьный газон.

В контрольной чашке с посевом испытываемого штамма питательная среда должна оставаться прозрачной.

В случае, если контроли соответствуют ожидаемым, проводят учет опыта. Если индикаторная культура растет в виде равномерно мутного газона, то испытываемый штамм не является лизогенным.

Если индикаторная культура не растет и среда остается прозрачной или на фоне мутного газона индикаторного штамма образуются мелкие прозрачные пятна с диаметром от 0,2 до 2,5 мм, то испытываемый штам является лизогеннЕлм и его удаляют из числа производственных штаммов.

В том случае, если контроли не соответствуют ожидаемым, опыт повторяют с новым раствором стрептомицина и индикаторным штаммом, пересеянным из пробирки со столбиком из 0,6%-ного агара из гидролизованного молока.

Новый штамм sir. diacetieocUs 563S отличается от известных по фаготипу и характеру негативных колони которые образуют бактериофаги при культивировании на данном штамме,о ладает чуэствительностью к умеренным фагам и способствует предотвра щению попадания бактериофагов с ли генными культурами в состав заквасок. Формула изобретения Штамм Streptococcue dlacetieoctis 563-5) нспользуекый для выявлени лизогенных штаммов молочнокислых стрептококков. Хранится в коллекци Всесоюзного научно-исследовательск го института маслодельной и сиродельной промышленности. Морфологические признаки. Величи на клеток суточной культуры на ага ре из гидролизованного молока 0,91,0 мк. Форма клеток слегка эллипсо идная, цепочки клеток короткие по 2-4 клетки. Физиологические признаки, в бульоне из гидролизованного молока в стадии интенсивного размножения образуют равномерную густую взвесь Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим зернистым осадком. При взбалтывании осадок легко взмучивается. При пересеве 18-ти часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1% наблюдается год-фаза 20-30 мин. Максимальная концентрация клеток 5-6 10®достигается за 7 ч инкубирования при 30° С, Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ед/мл. При посеве в молоко 1% 18-ти часовой бульонной культуры cryqTOK образуется за 16-18 ч. Сгусток плотный, равномерный, консистенция колющаяся. При посеве уколом в мясопептонную желатину сла&лй рост по линии укола. Разжижения среды нет. При посеве на агар из гидролизованного молока в чашки Петри через два дня образуются круглые, гладкие, блестящие, с ровным краем колонии. Размер колоний 1,0-1,2 мм. Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в среде до 1000 ед/мл. Отношение к углеродам. Сбраживает глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты. Маннит не сбраживает, Источники информации, ринятые во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР 600179, кл, А 23 С 9/12, 1976, 2,Авторское свидетельство СССР . 555133, кл. А 23 С 9/12, 1976 прототип).