Способ получения иммунной сыворотки Советский патент 1977 года по МПК A61K35/16 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к получению диагностических препаратов.

Известен способ получения имунной сыворотки, заключающийся в иммуниэации животного иммуносорбентами, представляющими собой белково-целлюлозные комплексы ij .

Однако известный способ не обеспечивает получения высокоактивной иммунной сыворотки.

С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способу иммунизацию проводят белком-поликонденсатом.

Материалом для приготовления сшитого антигена служит любой антиген белковой природа.

Концентрация белка антигена (гамма-глобулины человека или живот-ных, иммуноглобулины G , М и А ) перед его сшивкой должна быть в пределах 20-40мг/л, Сшивку белкового антигена проводят в течение 1 ч при 37°С,

К глобулину, помещенному на магнитную мешалку, постепенно добавляют 2,5% глутаровый альдегид в физиологическом растворе, объем глута ового альдегида 3/10 от первоначального объема раствора. Через 1 ч смесь снимают с магнитной мешалки и оставляют стоять 10 ч при комнатной температуре. Перед добавлением глутарового альдегида устанавливают рН бел-кового раствора 4,4, используя 1 К ВСЕ. Образовавшийся полимер размельчают в стеклянном гомогенизаторе Поттера или в ступке в 0,1 М фосфатном

буфере рН Т,2-7,4, а затем центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Далее повторяют растирание иммуносорбента последовательно в 0,1 М глицин- нее буфере рН 2,0-3,О,в 0,1 М

глицин - NaOH буфере рН 8,0 и 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 0,15 М KSaC2 рН 7,6. После каждого растирания суспензию центрифугируют и надосадочную йсидкость выбрасывают.

Последним раствором промывают

полимер до тех пор, пока надосадочная жидкость будет содержать меньше чем 0,040 мкг белка/мл при анализе на) спектрофотометре (при 280 нм).

Приготовленный таким образом

ммуносорбент хранят при 4°С в виде суспензии в 0,01 М фосфатном буфере, приготовленном на физиологическом растворе рН 7,6, Перед употреблением

иммуносорбент промывают фи

зиологическим раствором. Содержание белка в 1 мл суспензии определяют по сухому весу. Для этого 1 мл взвеси высушивают при 104С до постоянного веса. По разнице веса 1 мл раствора (в котором находится иммуносорбент) и вес сухого остатка после высушивания буфера судят о содержании белка в 1 мл иммуносорбента. Получение высокоактивной иммунной сыворотки проводят при использойании следующей схемы иммунизации.

Пример 1. Иммунизация 10 кроликов сшитым :гамма-глобулином че- ловека.

1 день. Первая иммунизация 3 мг сшитого белка ь 2 мл физиологического раствора внутримышечно, в область лимфоузлов двух задних лап.;

15 день. Вторая иммунизация 5мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоузлов двух задних лап.

30 день. Третья иммунизация 8мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоузлов двух задних лап.30 fiaeK отдыха. .

J реиммунизация - 1,2,3 день - 3,5,7 мг растворимого белка в мл физиологического раствора вводят внутривенно. На 8-9 день кровопускание, затем 30 дней отдыха.

П ,П1, и IV реиммунизации аналогичны I .

Получают антисыворотки от 8 кроликов с титрсФ 1:32 и выше и от двух кроликов - 1:16 (после всех реиммунизаций одинакового качества).

Пример 2. Иммунизация 10 кроликов сшитым гамма-глобулином морской свинки.

1 день. Первая иммунизация 5 мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутри1Фицечно в область лимфоузлов двух задних лап.

15 день. Вторая иммунизация 10 мг сзиитого белка внyтpи aлшeчнo в область лимфоузлов двух задних лай. .Отдых 30 дней.

Iреиммунизация - 1,2,3 день 3,5,7;Мг раствора гамма-глобулин а морской свинки внутривенно. На 8-9 день последней инъекции - кровопускание.

Отдых 30 дней.

II,311 и IV реиммунизации как и I . Получают антисыворотки, одинаковые по качеству как после 1 реиммунизации, так и последующих от 8 кроЛиков с титром 1:32,от одного кролиka 1:16 и от одного кролика 1:8.

25

Формула изобретения

Способ получения иммунной сыворотки путем иммунизации животных им;Мунос6рбентом, отличающий с я тем, что, с целью повышения активности сыворотки, иммунизацию проводят белкрм-прликонденсатрм.

35Источники информации, принятые

во внимание при экспертизе:

l.J.Noitore , 209, 1966, р.417.