Способ электрофоретического анализа белков Советский патент 1977 года по МПК G01N27/26 

Изобретение отпосится к изучению свойств и состава различных биологических объектов, связанных с производством продуктов питания, оценкой новых способов технологической обработки сырья, с производством лечебных препаратов.

Известен способ электрофоретического анализа смесей веществ, заключающийся в разделении смесей на бумаге в электрическом поле, фиксации фракций нагревом, окраске и отмывке фона 1J.

Иедостатком способа является длительность анализа и абсорбия разделяемых веществ бумагой.

В качестве прототипа взят способ электрофоретического анализа смесей веществ, заключающийся в разделении смеси на пленках из ацетата целлюлозы в электрическом поле, фиксации разделенных фракций нагревом или обработкой растворителями, окращивании, отмывке фона и регистрации разделенных компонентов 2.

Недостатком известного способа является длительность анализа и разрушение ацетатной нленки при фиксации и окраске.

Целью изобретения являются улучщение качества электрофореграмм и сокращение продолжительности анализа. Поставленная цель достигается тем, что окрашивание пленок проводят раствором красителя в с.меси с

трихлоруксусной и сульфосалицнловой кислотами, взятыми в концентрации 1-3%.

Пример. Ацетатные пленки пропитывают мединал-цитратным буфером, рП 8,7, про.мокают между листами фильтровальной бумаги, помещают в электрофоретическую камеру, в электродные отделения которой заливают буферный раствор того же состава. Камеру закрывают крыщкой и пропускают ток в течение 10 мин при градиенте напряжения 15 В/см, после чего камеру отключают от источника питания и с помощью дозатора наносят образцы исследуемой смеси в количестве 0,005 мл. Затем камеру закрывают крыщкой, подключают к тому же источнику питания на 20-30 мин при этом же электрическом и проводят разделение смеси белков. По окончании электрофореза пленки извлекают из камеры и окрашивают раствором 1%-ного амидочерного красителя в смеси с равными объемами 3%-ных растворов трихлоруксусной и сульфосалициловой кислот в течение 10 мин. Использование в качестве окрашивающего

раствора смеси равных объемов 3%-ного раствора трихлоруксусной и сульфосалициловой кислот исключает операцию фиксации разделенных фракций.

При этом отсутствие в окрашивающем растворе уксусной кислоты обеспечивает непрочную связь красителя с самими пленками, и фон легко и быстро в течение 10-15 мин отмывается смесью уксусной кислоты, метилового спирта и воды, взятыми в соотношении 1:5:4.

Затем пленки споласкивают дистиллированной водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги или на воздухе.

Более разбавленный в отношении спирта отмывочный раствор, действуюший в течение 5-10 мин, не изменяет свойств пленки и позволяет сохранять ее длительное время.

Количественная обработка результатов анализа может проводиться на микроденситометре или путем колориметрирования растворов после элюции окрашенных участков электрофореграмм.

Формула изобретения

Способ электрофоретического анализа белков, заключаюш,ийся в разделении смеси белков на пленках из ацетата целлюлозы, фиксации фракций, окрашивании, отмывке фона и регистрации разделенных компонентов, отличающийся тем, что, с целью сокращения продолжительности анализа и улучшения качества электрофореграмм, окрашивание нленок проводят раствором красителя в смеси с трихлоруксусной и сульфосалициловой кислотами, взятыми в концентрации 1-3%.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.Патент ЧССР Л 94567, кл. 42L 3/06, опубл. 1969.

2.Журнал «Clinical Chem 5, № 3, 1963.