Способ получения анти-антигемоцитарной сыворотки Советский патент 1979 года по МПК A61K39/00 

1

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к защите растений от насекомых-вредителей.

С целью повышения активности водорастворимых белков против насекомыхвредителей по предлагаемому способу антиген берут из клеток тела насекомого и вводят их животным, из крови которых получают антигемоцитарную сыворотку для последующего введения ее в тело насекомого, и из клеток тела насекомого выделяют затем анти-антигемоцитарную сыворотку.

Предлагаемый способ основан на новом принципе, который заключается в использовании иммунохимических свойств насекомых.

В качестве антигена используют клетки гемоциты насекомых Galleria mellonella L, которые вводят подкожно белым крысам 4 раза с интервалом 5 дней. Во время каждой инъекции вводят по 0,2 мл 50%-ной суспензии гемоцитов. Первую иммунизацию проводят подкожно, вводя каждой крысе по 0,2 мл 50%-ной суспензии в смеси с 0,04 мл адъюванта Фрейнда. Последующие иммунизации проводят внутримышечно, вводя по 0,2 мл 50%-ной суспензии в смеси с 16666 и. е. пенициллина для предотвращения возможного инфекционного процесса. Перед первой иммунизацией берут кровь для определения наличия у крыс естественных антител против гемоцитов гусениц. Спустя 1 дней после последней иммунизации крысы обескровливаются. Полученную антисыворотку инактивируют при 56° С в течение 30 мин и хранят при -20°С. В результате получают ряд антигемоцитарных сывороток. Титр гемоцитоаглютининов

1:256-1:2048.

Полученную антигемоцитарную сыворотку вводят гусеницам G. mellonella L. в период их развития V-VI возрастов однократно в дозе 0,25-0,50 мкл каждой. Через 24 ч. после инъекции удаляют гемолимфу и пищеварительный тракт. Затем тело гусениц промывают физиологическим раствором 0,8%-ного хлористого натрияв дистиллированнойводе.

Для получения анти-антигемоцитарной сыворотки гусениц гомогенизируют и разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:1. Полученную массу многократно замораживают и оттаивают

с целью разрушения клеток. Затем в течение 15 мин центрифугируют при 8000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость (анти-антигемоцитарную сыворотку) хранят при -20±2°С. 3 Надосадочная жидкость - анти-антигемоцитарная сыворотка имеет светло-коричневый цвет со слабо выраженным запахом, присущим запаху гусениц G. mellonella L.; кожных реакций при попадании на тело5 человека не вызывает. При попадании в тело насекомого антиантигемоцитарная сыворотка повышает патогенные свойства бактерий, что подтверждается микроскопическим анализом прию усилении роста энтомоиатогенных бактерий Вас. thuringiensis. 4 Формула изобретения Способ получения анти-антнгемоцитарной сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения активности водорастворимых белков против насекомых-вредителей, антиген берут из клеток тела насекомого и вводят их животным, из крови которых получают антигемоцитарную сыворотку для носледуюш,его введения ее в тело насекомого, и из клеток тела насекомого выделяют затем анти-антигемоцитарную сыворотку.