Способ получения водонерастворимых протеиновых препаратов Советский патент 1977 года по МПК C08F8/00 C07G7/00 

Л (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИМЫХ ПРОТЕИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ 1ственно этиленоксид и проп окись стирола, преимущ ять продукты взаимодейств леноксид. Можно примеь соединений, по крайней мере, с двумя актив1Ш1МИ 1И водорода, которые берут по Церевитинову фенолов, с вышеназванныначало не от спиртов или I получения ДИ- и/или полими алкиленоксидами- дш и метакрилаты ди- и/или метакрилатов. Ди- и/и; по данному способу, полуполиолы, применяемые например взаимодейчают известными методами сгнием да- и/или полно :ов с хлорангидридом метаприсутствии примерно эквикриловой кислоты в носителыю хлорангидрида, молярных количеств, о на|фимер триэтиламина, при третичных аминов в бензоле. Применяют дитемпературах ниже 20 и/или полиолы по мере с 2 атомами нно с 2-12 атомами углеуглерода, преимуществ пропандиол- 1,2, этилеь гликоль. рода, например пропандаол- 1,3, , особенно бутандиолбутандиолы-1,4, гександиолы, дек ндиолы, глицерин, тримесорбит, сукроза и протилолпропанпентазритэит, взаимодейс вия дукты их с указанными выше алкиленоксидами. При одны также полибисхлорметилоксациклобутан, юлистиролоксид или смесь ДИ- и/или полиолов. П зеимущественно применяют диолов с 2-4 атодимет; крилаты диакрилаты или мами углерода и/или продукты взаимодействия с 1 - 10 молями алкиленодного моля этого оксида с 2-4 aTOMoMv углерода или триметилолПредпочтительны диметапропантриметакрилаткрилаты этиленглико; я, диэтиленгликоля, тритетраэ -иленгликоля этиленгликоля, или высил1х полиалкиленгликолей с молекулярным весом до 500 или их смеси. ретья группа компонентов сопояимеризации соек ит из простых ненасыщенных, гидрофильных м iHOMepOB. В качестве таких ационноспособные простые применяют полимери; ненасыщенные соедин :ния, которые не имеют функциональных групг активных по отношению к и образуют гидрофильные ангидридным группам полимеры Гидрофильные мо омеры имеют преимущесткарбокси, гьную аминокарбогшльную, венно одну сульфо- или сульфамицную группу, причем амин в аминокарбонильной сульфамидной группе может быть замещен алк: лами с 1-4 атомами углероюй группой с 1-4 атомами да или алкоксиметиль В качестве примера алкоксира шкале углерода в следует привести &кр1 ловую кислоту, метакрилоВуЮ кислоту, МОНОЭФ1 малеиновой кислоты с 1-8 С иртовой группе, N - винилатомами углерода в лактамы, например Г винилпирролидон, метакриламид, N замеще ные метакршгамиды, например N - метил- и N метоксиметилметакриламидилтаурин. Их добавляют в и N - акрилоилдимет эт общей смеси мономеров, количестве 5-60 вес.% ебуемой гидрофильности и в зависимости от TJ набухаемости получае ых сополимеров и от длины ЮПИ (и) MHOrOOCHOBHOrOi ,полиалкиленоксидпой метакрилата, Добавка этих мономеров влияет не только на гидрофит но:ть, но и на структуру ономера, что имеет значительное преимущество ри получении полимера, так как при этом виде олимеризации выбор разбавителя сильно ограниен из-за условий нерастворимости смеси мономеов в парафиновых углеводородах и его инертности к нгидридным группам. Изменением состава моноерной смеси можно в широких пределах менять идрофильность, густоту сетки, набухаемость и соержание ангидрид1п Х групп в предлагаемых сопоимерах, пригодных для соответствующих цепей. аряду с ДИ- и/или полиметакрилатами добавляют акже обычные средства для сшивания, по крайней ере с 2 несопряже1шыми двойными связями, наример дивиниладипат, метиленбисакриламид, трикрилформа.г1ь или триаллилцианурат в количестве римерно 0,01-ЗОвес.% относительно мономерной смеси. Полимеризацию проводят в органическом растворителе в виде осадительной полимеризации, причем полимер начинает вьшадать вскоре после начала полимеризации. Используют растворители, инертные к ангидридным группам: алифатические, циклоалифатнческие и ароматические углеводороды, а также галоидзамещенные углеводороды, алкилароматику и эфиры карбоновых кислот, например гептан, октан, изооктан, беизиновые фракции с точками кипения от 60 до 200° С, циклогексан, бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорбензолы, этилацетат, бутилацетат. Растворитель должен иметь температуру кипения выик 60° С и хорошо удаляться в вакууме из полимера, полученного осадительной полимеризацией. На 1 ч. мономерной смеси применяют примерно 2-50, предпочтительно 5-20 вес.ч. растворителя. На свойства сополимера, особенно на насыпной вес и удельную поверхность, оказывает значительное влияние вид и количество растворителя. Во многих случаях применяют смесь Бышеназва1пп,1х растворителей, или начинают полимеризацию в растворителе для полимера и в процессе полимеризации непрерьшно вводят осадитель дпя полимера. Осадитель можно добавлять также в определенные моменты одной или несколькими порциями. Кроме того, мономерную смесь слодходящим инициатором можно подавать в виде раствора или без растворителя в рассчитанное количество растворителя, так, чтобы во время полимеризации сохранялась равномерная незначительшя концентрация мономеров. Благодаря применению метакриловых мономеров различной гидрофильности и вариацией условий полимеризации получают 1фодукты хорошей механической стабильности с широкой областью .набухаемости, плотности и удельной поверхности. Сополимеры преимущественно получают суспензионной полимеризацией. В известном виде бисерной полимеризации, в котором мономеры с добавкой opraiwHecKoro растворителя суспендируют в иоде, ангидрид очень быстро гидролизуется, возникающая дикарбоновая кислота переходит в водную фазу и лишь незначительная часть входит s полимер, поэтому суспензионную полимеризацию

целесообразно проводить в органической среде. В качестве дисперсионной среды используют парафиновые углеводороды, например гексан, гептан, октан и высише гомологи, циклошшфатика, например циклогексан, а также смесь парафинов, например гексан, гептан, октан и высшие гомологи циклоалифатика. например циклогексан, а также смесь шрафииов, например бензиновая фракция или парафиновое масло. Мономеры и инициатор растворяют в растворителе, (ю смешивающемся с парафинами и инертном к ангидридным группам, например ацетонитрил, диметилформамид, диметилсульфоксид или триаг,ШД гексаметилфосфорной кислоты и распределяются в дисперсионной среде большей частью при добавке д гспергагоров. Соотношение, объемов дисперсионной среды и мономерной фазы составляет 1:1 - 10:1, преимуществе1гно от 2:1 до 5:1. Для стабилизации суспензии применяют, например моно- и диолеат глицерина, а также смесь этих соединений, моно- и триолеат или стеарат сорбита, мопоэфиры полиэтилеш-ликоля со стеариловым и лауриловым спиртом или нонилфенолом, моноэфиры полиэтиленгликоля с олеиновой, стеариновой и другими жирными кислотами с числом атомов углерода более 10, а также натриевая соль диоктилового эфира сульфоянтарной кислоты. Эти веш;ества вводят в количествах, преимущественно 0,1-10% относительно мономерной смеси, и растворяют в углеводородной фазе. Размер частиц может быть уменьшен не тол1зко увеличением скорости перемешивания, но и добавлением 0,01-2%, относительно мономера, поверхностно- активного вещества, например алкилсульфоната. Полимеризация ишщиируется радиальными инициаторами. Подходящими инициаторами являются, например азосоединения или перекиси. Азоизобутиронитрил является наиболее распространенным азосоединением для инициирования полимеризации. Из перекисных соединений приме1шют главным образом диацилперекиси, например перекись бензоила, или перкарбонаты, например диизопропил- и дициклогексилперкарбонат, а также диалкшшерекиси, гидроперекиси и эффективные в органических растворителях редокс- системы. Инициаторы добавляют в количествах 0,01-10 вес.%, преимущественно 0,1-3 вес.%, относительно мономерной смеси. Полимеризацию проводат при температурах примерно 20-200° С, преимущественно при 50-100° С, в зависимости от скорости распада инициаторов и чаще всего ниже температуры К1тения растворителя, а при бисерной полимеризации ниже температуры смешиваемости обеих фаз. Кроме того, полимеризацию выгодно проводить в инертной атмосфере в отсутствии кислорода. Сополимеры, полученные осадительной полимеризацией, являются бесцветными или светложелтыми порошкообразными веществами с насьшным объемом 1,5-30 мл/г, преимущественно 2-20 мл/1, и удгльной поверхностью 0,1-500 , прешюч-штеньно l-400MVr- Содержание карбонильных групп, опред1 лепных титрованием после

омыления ашидридных групп составляет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,01 - 11 мэкв/г. Суспензионный полимер представляет собой белый или слегка окращенный бисер, который в некоторых случаях может быть неправильной формы и имеет диаметр 0,03 - 3 мм, преимущественно 0,05-0,5 мм, и насыпной объем примерно 1,4-8 мл/г, преимущественно 1,4-5мг/г. Содержание Kap6oHHjn Hbix групп в нем, (шределенных после гидролиза ангидридных групп, составляет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,0211 мзкв/г. В сопо;шмерах мономерные едшшцы в основном распределен. статистически. Из-за . высокой плотности сетки в сополимерах, они растворимы не во всех растворителях, поэтому нельзя определить их молекулярньш вес. Сополимеры набухают в воде до 1,1-3-х кратного насьшного объема и могут быть использованы в качестве смолы-носителя для фиксирования веществ, способных реагировать с ангидридными группами сополимера. Кроме того, они обладают отличной механической стабильностью, и следовательно практически не изнашиваемы. Вьшкописанные смолыносители образуют связи со всеми веществамн,

которые имеют функциональные группы, способные реагировать с ангидридными группами полимера. У протеинов и пептидоВ это прежде всего концевые аминогруппы лизина и свободные аминогруппы на концах-пептидных цепей. Реакцию проводят путем добавления к перемещиваемому водному раствору протеина при 0-30°С необходимого количества полимера. Весовое соотношение протеина к смоле-носителю может меняться в широких пределах. Хорошие выходы получают прн соотношении 1 вес.ч. протеина и 4-10 вес.ч. полимерного носителя. Однако оптимальное соотношение зависит как от состава и структуры полимера, так и от вида протеина. Для многочисленных ферментов целесообразно добавлять стабилизаторы. В качестве

таковых применяют полиэтиленгликоли и неионный смачиватель для ослабления денатурации на поверхности, а также известные сульфогидрильные реагенты или ионы металлов для специальных ферментов. рН-метром поддерживают оптимальное для

соответствующей связи значение рН 2-9, преимущественно 5-7. При использовании пенициллннацилазы целесообра:но значение рН 5,7-6,8. Причем для постоянного поддержания рН добавляют неорганические (раствор едкого натра) или органические (органические амины) основания. О ходе реакции судят по количеству основания, необходимого для поддержания постоянного рН. При комнатной температуре для завершения реакции необходимо примерно 16ч, при 4° С- до 40ч. Затем смолу

отсасывают и для отделения незначительной доли ионносвязанного протеина промьшают буферным раствором или раствором поваренной соли концентрацией от 0,2 до 1 М. Присоединенное вешество определяют элементарным анализом или для ферментов и ингибиторов ферментативной активферментативной активностыо, или подавлением ности. Выход на npHcoewi енное вещество зависят юстава полимера. Так, от породы вещества и например а «нокислоты и ннзкомолекулярные пептиды практически полюстью расходуются в П}жсоединении, но у проте 10В выход по присоедиявности лежит от 20 до юшюй ферментативной а свыше 90% первоначально активности, Пример 1а. 70 г тет метилеигликольдиметакрилата, 20 г метакрилов

кислоты, 20 г 0леиноазоиз обутиронитрнла вого анпщфяда и 1 г растворяют в 1 л бензолами сна|1ала полимернзуют при 60° С 4 ч. Затем добавляют

г азоизобутиронитрила Ю-140°С) и полимерии 200 мл бензина (Т.кнп прн 80° С. Порошкообраззуют 2чпри 70С н 2ч

промывают петролейшли полимер основатель} -50°С) и. сушат в ваным эфиром (Т.кип. 3 шной объем 8,8 мл/г. кууме. Выход 96 г. На

12,4 мл/г. Удельная Объем набухания в вод поверхность 8,. С держание кислоты после пп 3,85 мэкв/г. омыления ангидридных гр П р н м е р 16.6 г смот ii-носителя, полученного /ют в растворе бШедипо примеру 1 а, суспенди

в 150 мл воды. Добавниц (и) пенициллинацилаэ. ющью рН-метра поддеркой раствора N NaOH с по ию перемешнвают 20ч живают рН6,3 и суспен при 25° С. Затем через стеклянный

отсасы ают о 300 мл сначала 0,05 М фильтр N 3 и промывают 17,5, содержащий 1 М фосфатным буфером с

затем тем же буфером раствор хлортстого натри без хлористого натрия.

Слив и промьшные

астворы объединяют и ощ еделяют их ферментати ную актнвность. В аликвотном количестве и меряют ферментативную активность влажной смоль Ферментативная акти

ность (НИФАК-т«ст),и Исходный раствф

610 Слив и промьшные р

створы112 Смола-носитель поел

присоедииения 92% исходной

ктивиости561 Ферментативную акти

ность пешщнллинацнлазы измеряют колорнмет чески или титрованием М раствором 6 - ни ю - 3 (N- фенилацетил) ы (НИФАБ) в качестве аминобензойной кисло субстрата арн pH7,S н 1 С Молярный козффитвующей 6 - нитро 3 ииент экстинкцни соотве -амннобензойной кнслот равен E4osHM 9090. 1 единица (U) соответств т превращению 1 ммоля субстрата в мин.

Пример 1 в. В рас

ор 40 мл уреазы в 32 мл воды, суспендируют 400j смолы-носителя, полученной по примеру 1 а. П и постоянном перемешит{емпературе величину рН вании при комиатнш 6,0 добавлением 1 N поддерживают постоями Ъакция оканчивается чераствора едкого натрия рез 16 ч, смолу отсасыва т и промывают буфером как в примере 1 б. Ферментативная

активность, U Исходный раствор

168

Слив и промьшные растворы64,5

Смола-носите ль после прнсоедннекия 52% исходной активности87

Ферментатнвную активность уреазы определяют итрованием 0,17 М раствором мочевины при 25° С pH6,lil единица (U) соответствует количеству ермента, который расходуется на 1 ммоль мочевиы, на 2 ммоля соляной кислоты в минуту.

Пример г. В раствор 100 мг трипсина в 32 мл 0,02 М растворе хлорида калыщя суспендируют 500 мг смолы-носителя, полученной по примеру а. Прн постоянном перемещивании при 4° С

велнчину рН поддерживают постоянной 6,3 добавой N раствора едкого натрия. Через 16 ч смолу тсасьшают и промывают буфером как в примере 16.

Ферментативная активность, U Исходный раствор110

Слив и промьшные растворы15,6

Смола-носите ль после присоединения 58% исходной активности 64 Ферментативную активность измеряют колориетрически по Тушш (Тирру), бензол - аргинин -иитроанилидом (БАПНА) в качестве субстрата. единица (U) соответствует расщеплению ммоль субстрата при 25° С н рН 7,8.

П р и м е р 2 а. fttcraop 80 г тетраэтиленглиольдиметакрилата, 0 г метакриловой кислоты, 0 г маленнового ангидрида и г азобутироннтрила в 1 л бензола пошшеризуют при медленном перемещиванин в течение 4 ч при 60°С, 2 ч при 70°С и ч при 80° С. Полимер отфильтровьшают, трижды перемещивают в бензоле, промьшают в петролейном эфире н сушат в вакууме. Выход составляет 70 г. Насыпной объем 7,0 мл/г, объем набухания в воде 8,2 мл/г. Удельная поверхность 5,3 . Содержание кислоты после омылення ангидридных групп 2,55 мэкв/г.

Пример2б. г полимера, полученного по примеру 2 а, взаимодействует аналогично примеру б с пеннщишинацилазой в 33 мл воды прн рН 6,3.

Ферментативная активность, U Исходный раствор 8

Слив и промьшные растворы21

Смола-носите ль после присоединения 69% исходной активности 82

ПримерЗа. 50г тетраэтиленгликольдиметакрилата, 30 г метакриловой кислоты, 0 г малеинового ангидрида н г азоизобутиронитрила растворяют в 300 мл ацетонитрила. Раствор суспендируют в л бензина (Т.кип.- 00-140°С), которьш содержит 5 г смеси моно- и диолеата глицерина, и полимеризуют 22 ч прн 60° С, Полимерный бисер отфнльтровьшают, трижды суспендируют в бензоле затем дважды в петролейном эфире (Т.кип.30-50°С) и сушат в вакууме. Выход 94 г белого бисера. Насыпной объем 4,4 мл/г. Объем набухания в воде 5,5 мл/г. Удельная поверхность 6,. Средний

диаметр частиц 200 мкм. Содержание кислоты после омыления ангидридных j-pynn 4,3 мэкв./г.

Примерз 6. 1г полимера, полу1ешюго по примеру 3 а, взаимодействует аналогично примеру 1 б с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативная активность (НИФАБ-тест) ,U Исходный раствор118

Слив и промьшные растворы43

Смола-носитель после присоединения 81% исходной активности 96 Пример4а. Раствор 2100 г тетраэтиленгликольдиметакрилата, 600 г метакрилозой кислоты, 300 г малеинового ангидрида и 30 г азоизобутиронитрила в 7,5 л ацетонитрила суспендируют в 21 п бензина (Т.кип.ЧОО-140°С), в котором растворено 150 г смеси моно- и диолеата глицерина, и полимеризуют 1ч. при 50° С и 20ч при 60° С. Бисерный полимер отсасьгаают, дважды перемешивают с петролейным эфиром (Т.кш1. 30-50° С) и сушат при 60° С. Выход 2,95 кг. Насьшной объем 4,7 мл/г. Объем набухания в воде 5,4 мл/г. Средний размер частац примерно 0,3 мм. Содержание кислоты после омыления ангидридных групп 4,0 мэкв/г.

Пример4б. 1г полимера, полученного по примеру 1 б, взаимодействует с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативная активность (НИФАБ-тест), и

Исходный раствор107

Слив и промывные растворы27

Смола-носите ль после присоединения 63% исходной активности67 Пример4в. 20г полимера, полученного по примеру 4 а, вводят при комнатной температуре в 600 мл раствора 1 г неспецифической эластазы из панкреазы свиньи при перемешивании. При этом рН поддерживают постоянной 5,8. Через 16ч смолу отсасьшают и обрабатывают по способу, описанному в примере 1 б.

Ферментативная активность (казеин-тест), Е

Исходный раствор2180

Слив и промывные растворы993

Смола-носитель после присоединения 56% исходной активности1225 Ферментативную активность неспецифической зластазы определяют титрованием казеином (концеитрация 11,9мг/мл) при рН8,0 и 25° С. 1 единица (Е) соответствует расходованию 1 ммоль.едкого калия в .

П ример5а. Раствор 80 г тетраэтиленгликольдиметакрилаха, 10 г метакриловой кислоты, 10 г малеинового ангидрида и 1 г азоизобутиронитрила в 300 мл ацетонитрила полимеризуют по примеру 3 а. Выход 92 г белых, яйцеобразных частиц. Насьтной объем 2,5 мл/г. Объем набухания в воде 3,2 мл/г. Удельная поверхность 1,. Средний размер частиц 125 мкм. Содержа1ше кислоты после омыления ангидридных гру1Ш 3,5 мэкв/г.

10

Пример5б. 1г полимера, полученного по примеру 5 а, взаимодействует с пенициллинацнлазой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативная активность

(НИФАБ-т«ст), и

Исходный раствор118

Слив и промывнь.е растворы34

Смола-носитель после щжсоединения 52% исходной актнвностн61

Примерба. PiCTBOp 50 г этиле нгликольдиметакрилата, 40 г метакриловйй кислоты, Ш г малеииового ангидрида и 1 г азоизобутиронитрила в 300 мл адетонитрила суспендируют в 1 л бензина (Т.кип. 100-140°С), в котором растворено 5 г смеси моно и диолеата глицерина, и полимеризуют 20ч при 60° С. Бисерный полимер отфильтровывают, трижды суспендируют в бензоле и дважды в петролейном эфире (30-50° С) и суиит в вакууме при 50°С. Выход 87г. Насьтной объем 4,8 мл/г. Объем набухания в воде 5,6 мл/г. Удельная поверхность 13,2 . Содержание кислоты после омыления ангидрндных групп 4,2 мэкв/г.

Примербб. 1г полимера, полученного по примеру 6 а, взаимодействует с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативная активность (НИФАБ-тест), и

Исходный раствор118

Слив и промьшные растворы29

Смола-носите ль после присоединения 47% исходной активности55

П р и м е р 7 а. Раствор 50 г тримелолпропантриметакрилата, 30 г метакриловой кислоты, 20 г малеинового ангидрида и 1 г азоизобутиронигрила в 300 мл ацетонитрила полимеризуют аналогично примеру 6 а. Выход 86 г. Насьшной объем 2,0 мл/г. Объем набухания в воде 2,2 мл/г. Средшш размер ИСТИЦ 30 мкм. Содержание кислоты после омыления ангидридных групп 4,1 мэкв/г.

Пример7б. 1г полимера, полученного по

примеру 7 а, при колшатной температуре и постоянном перемешива1ши смешивают с раствором 100 мг лизина в 32 мл воды. Величину рН поддерживают постоянной 6,3. Через 16 ч смолу отсасьшают, суспендируют в 50 мл 1 М раствора хлористого натрия, отсасьшают и промывают 100мл воды. Осадок сушат в вакууме при 100° С и определяют содержание азота по способу Кьельдаля. Сухой вес 860 кг. Содержание азота 1,5% (соответственно содержаниш смолы с 65 мг лизина), что соответствует 65% введенного количества лизина.

П р и м е р 8. Полимеризаш1ю проводят аналогично примеру 6 а (в опытах 1-7 изменяют количества малеинового ангидрида). Ргзультаты

опытов приведены в таблице.

Примечание: ТЭГМ тетразтиленгликольдиметакрилат, (г); метакриловая кислота, (г); МА - малешювый ангидрид, (г) ; АИБН - азоизобутиронитрил, (г) ; эмульгатор-смесь моно- и диолеата глицерина, (г); ацетонитрил и бензин, (мл) ; Ун-насышой объем, (мл/г); Унб объем набухания в воде, (мл/г); кислота-содержание кислоты после омыления ангидридных групп.

70 г тетразтиленглиП р н м е р 9 а. акриловой кислоты, 10 г кольдиметакрилата, 20 i 1 г азоизобутиронитрила малеинового ангидрида воздуха и при медленв 1 л бензола в отсутствии реют 4 ч при 60° С, 2ч ном перемешивании при70°С и 2ч при 80°( . Высокцдисперсный полив бензоле и дважды в мер суспендируют трш{ды и сушат в вакууме. Выацетонитриле, отсасьшапт :М 6,8 мл/г. Объем набухаход 94 г, Насьшной обт ния в воде 7,6 мл/г. Содержание кислоты после

1,64миллизкв/г. омыления ангидридных групп

Пример9б. 1 полимера, полученного по примеру 9 а, взаимодействует с пенициллинациларН6,3 аналогично прйЗОЙ в 32мл воды

щи меру 1 6.

Ферментативная а1 тивность

(НИФАБ-тест), U

107 26

Исходный раствор

Слив и

1 промьшные растворы

Смола-носите ль по :ле

присоеди38.

нения 36% исходнс и активности

Пример 10 а. Раствор 50 г тетразтилешликопьди летакрилата, 40 г N-вшшлпирролидона, 10 г малеинового ангидрида и 1 г дициклогексилперкарбонатв в 200 мл адетонитрила суспендируют в 1 л бензина (Т.кип. 100-140°С), когорьш содержит 5 г смеси моно- и диолеата глицерина; и при перемешивании греют 18 ч при 50° С. Затем добавляют 1 г инициатора и перемешивают 8 ч при 60 С. Полимерные шарики промывают бензолом и петролейным эфиром и сушат в вакуутле. Выход 54 г прозрачного бисера. Насьшной объем 1,6 мл/г. Объем набухания в воде 2,4 мл/г. Средний диаметр частиц 0,3 мм. Содержание кислоты после омъ1ления ангидридных групп 3,3 мзкв/г. Содержание азота 3,4% (27% N винилпирролидон).

пример 10 б. 1г полимера, полученного по примеру 10 а, взаимодействует с пеншдшлинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативная активность

(НИФАБ-тест), U

Исходный растворЮ

13

Слив и промывные растворы26

Смола-носитель после присоединения 77% исходной активности82 Пример 11 а. Раствор 70 г тетраэтиленгликольдиметакрилата, 20г метакриламида, Юг малеинового ангидрида, 1 г азоизобутиронитрила и 200 мл ацетонитрила суспендируют в бензине аналогично примеру 5 а и полимеризуют. Выход 93 г. Насыпной объем 2,0 мл/г. Объем набухания в воде 3,3 мл/г. Содержание кислоты после омыления ангидридных групп 1,7 мзкв/г.

ПримерПб. 1г полимера, полученного по примеру 11 а, взаимодействует с пенициллинацилазой в 32 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативная активность

(НИФАБ-тест),и

Исходный раствор107

Слив и промывные растворы42

14

Смола-носите ль после присоединения 31% исходной активности33

Формула изобретения

Способ получения водонерастворимьгх протеиновых препаратов nyieM взаимодействия полимерного носителя с раствором протеина в водносуспензионной среде, отличающийся тем, что, с целью получения протеиновых препаратов с высокой степенью сшивки, в качестве полимерного носителя иотользуют сополимер 0,1-30 вес.% ангидрида а,/3 - моноолефиновой дикарбоновой кнслоты с 35-90 вес.% ди- и/или полнметакрнлата дни/или полиола и с 5-60 вес.% гидрофильного мономера.

Источники информации, принятые во внимание при Э1 ;спёртизе:

1, Biochemist ГУ, 3. 1964. 1905-1909.