Изобретение относится к технической микробиологии, а именно к питательным средам рля культивирования протеаз с фибринолитической активностью, и может быть использовано в медицине, гематологии, физиологии и биохимии.
Известна питательная среда для выращивания фибринолитической активностью, содержащая источник азота, глюкозу, лимоннокислый трехзамещенный натрий, одкозамешенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислое жепезо и воду l.
Цель изобретения - повышение выхода целевого фермента и увеличение соотношени фибринолитическрй активности с казе1щолитической.
Для этого в качестве источника азота используют сернокислый аммоний при еледуюшем соотношении компонентов, r/lOONm
Сернокислый аммоний0,1-0,2
Глюкоза6,О-7,5
Лимоннокислый трехза-
меш. натрий0,4-0,55
О дцозамещецный
фосфат калия0,1-0,3
Сернокислый ,4-О,6
Сернокислый цинк0,0005-0,0015
Сернокислое железоО,ОО15-О,ОО25
ВодаОстальное цо
100 мл.
Предлагаемая питательная среда является синтетической и обеспечивает штецсивное образование протеазы с фибринолитической активностью (ФА) на 72 ч разв{ггия культу АКГТкРО ЧНА „
ры В количестве 7ООО- Хкум1т.жиб,.и. - -известяом тачническом решении эта величина
МКГ ТИ О ИИАг,
равна 2500 ;:,,,,,Т.ЖИА.Ч ,Преалагаемая cjjeija обеспечивает также увеличение .соотношения фибринолитической активности с казеинолитической активностью до 0,515 ( , по сравнению с 0,3 в известном техническом решении. ...
Продуцентом фибриншитических ферментов является, например актш10М щет AciinoTnaces aptiei-oides, штамм 35. Этот штамм хранится в коллекции культур кафедры Микробиология Московского государственного университета. Пример. KynwHSHpCkBaRHe актндоми цета Actinom ces spheroi es штамм 35 проводят в два этапа. На первой ступени кулыгивирования выра щивают глубинный посевной материал для предлагаемой сиктетической . Для этого продуцент выращквают на извест ной скошенной агаризовавиой среде в течение 7-14 дней. Затем кул1лгуру актиноми- цета с одной пробирки вносят вместе с ага ром в 20О мл- . известной питательной среды для культивирования глубинного посевного материала. Посевной материал вьфашнвшот на качалках (180-200 об/м) в ем юстью 75О мл со 100 мл среды в кдждой в те« чение 72 ч. при 26, 28 С. На второй сту пени культ-ивирования ray6vsHHbjM посевным материалом в количестве 5% по объему засевают предлагаемую питательную среду. Предлагаемая синтетическая среда имеет следующий состав в г/100 мл среды: Глюкоза7,1 0,Na,, КН, РО, ( )-S04 Mg-SO In 504 Вода дисгиллированная, рН 8,0Остальное. Выращивание штамма проводят в условиях, аналогичных условиям выращивания глубинного посевного материала. Величина рН куль туральной жидкости при этом снижается за 24 ч. до 7,35 и Б процессе дальнейшего культивирования остается постоянным, Фибринолитическуто (ФА) и казеинолитн- ческую (КА) активности целевого продукта определяют в освобожденной от мицелия культуральлой жидкости известным способом путем определения продуктов гидролиза фибрика и 1%-ного раствора казеина в трис - - нее буфере, рН 9,0, 100 мкг препарата ферйента, находящимися в 80 мкл культуральной жидкости, при - 37 С. Определяя ФА, получают после 72 ч культивирования максимальное накопление активности, -УГЧПГ ТИРОЗИНА равное 7000 .жид и возрастание соотношения фибринолитической активности к казешголитической до 0,515, В таблице представлены данные по накоплению культурой ActiTioTWjces spherbides штамм35 препарата фибринолитических и каэеинолйтическ1ос ферментов при выращивании культуры на прецложенной и извест ной средах.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм актиномицетов @ @ @ 8-2-продуцент тромболитических ферментов,специфичных к фибрину | 1981 |
|
SU1010127A1 |
| Способ получения тромболитических ферментов специфичных к фибрину | 1981 |
|
SU973615A1 |
| Среда для получения протеолитических ферментов | 1981 |
|
SU971877A1 |
| Способ получения очищенного протеолитического фермента | 1977 |
|
SU732382A1 |
| Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов | 1980 |
|
SU973609A1 |
| ШТАММ ASPERGILLUS CLAVATUS - ПРОДУЦЕНТ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ С КЕРАТИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 2021 |
|
RU2774366C1 |
| Способ получения фибринолитического фермента | 1972 |
|
SU493504A1 |
| Штамм актиномицета SтRертомUсеS LaVeNDULae - продуцент протеолитических ферментов | 1989 |
|
SU1735364A1 |
| Способ получения протеиназ с фибринолитической и фибриногенолитической активностями | 2016 |
|
RU2664468C2 |
| ШТАММ SAROCLADIUM STRICTUM - ПРОДУЦЕНТ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ С АКТИВАТОРНОЙ К ПЛАЗМИНОГЕНУ АКТИВНОСТЬЮ | 2019 |
|
RU2728456C1 |
Известная48 7,8. 1340
25ОО 1,86
Предлагаемая72 7,35 19ОО 7150 3,76
Ife таблицы видно увеличение на предлагаемой среде фибринолитической активно„,AAK TtrpOiUHA
сти до 7150 -;:;ГК А.Т.,КИД.Ц. . возрао
тание. соотношения ФА/КА до 0,515 при сохранении на прежнем уровне казеинолитической активности.
Формула изобретения Питательная среда для выращивания протеаз с фибршдолитической активностью, содержащая источник азота, глюкозу, лимон
12650 0,095 0,29 410
13916 0,073 0,515 510
нокислый трехзамещенный натрий, однозаме- щенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислое железо и воду, отлича-ющаяся тем, что, с целью повышения выхода целевого фермента и увеличения соотношения фибринолитической активности к казеинолитической, в качестве источника азота используют сернокислый аммоний, при следующем соотношени компонеитов, г/100 мл: 5 Сернокислый аммоний 0,1-0,2 Глюкоза6,О-7,5 Лимоннокисль:й трехзамещенный натри{ О,4-О,555 Однозамещенный, фосфат капия. 0,1-0,3 Сернокислый магний 0,4-0,6 Сернокислый цинк0,,ОО15 ю 5793 О5 6 Сернокислое железо 0,О015-О,0025 . Вор.аОстйлыше до 100мл, Источвнки информации, принятые во винмание при экспертизе: 1. Ушакова В, И., Егоров 11. С. и Солодовникова Н. И. Обра ование фибринсилитического и каае1шолитического фермента Acti oTnvces &p-«cVes штамм 1, Микробиология, 1968, т. 37, вып. 4, с. 729,
