Штамм васIвLUS SUвтILIS Советский патент 1982 года по МПК C12N1/20 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и ка сеется получения нового штамма, продуцирующего иозин, используемый в фармакологии и в качестве исходного соединения при получении инозиновой кислоты и других пуриновых производных.

Известен штамм Bacillus subtilis ЦМПМ В-1321-- продуцент инозина Однако он не обладает высокой продуктивностью.

Цель изобретения - получение штамма с высокой продуктивностью инозина.

Это достигается путем выделения мутанта исходного штамма Bacillus subtil is ЦМПМ В-1321 в результате применения генетико-селекционных методов.

Штамм Bacillus subti 1 is ЦМПМ В-1321 - продуцент инозийа хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института генетики

и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-1321 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Спорообразующая палочка размером 3-5x0,6-0 ,8 jU . Размер спор 1,0-1,2XO,6-0,7pj .

Мясо-пептонный агар. При инкубации в течение 8 ч при 37С образует желтовато-серые круглые колони, в центре выпуклые, диаметром 2,S ЗвО мм, с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность шероховатая, морщинистая, матовая, Мясо-пептонный бульон. При инкубации в течение ч при 37С без встряхивания наблюдают помутнение среды, на поверхности образуется морщинистая, сухая пленка, при встряхивании на качалке - сильное помутнение среды. При стоянии образуется осадок,

Агаризованная среда Хоттингера, При инкубации в течение 8 ч при 37 С образует желтовато-серые круглые колонии, в центре выпуклые с бе лым оттенком, диаметром 2-2,S мм с лопастными краями, срастаются с суб стратом. Поверхность морщинистая, шероховатая, матовая,, Синтетическая среда с минеральным азотом. Рост отсутствует. Ломтики картофеля. Пигмента не образует Имеет матовую, сухую морщинистую поверхность, физиолого-биохимические признаки Грамположительный, аэробный, рост поверхностный. Желатину разжижает. Крахмал гидролизует. Молоко пептонизирует и подщелачивает. Отношение к источникам углерода. Усваивает глюкозу, галактозу, лакто зу, фруктозу, мальтозу, маннозу, ра нозу, сахарозу, глицерин, При росте на синтетической среде нуждается в аденине, тирозине, гисти дине. Оптимальный выход инозина 1012 г/л за 65-12 ч ферментации. Пример 1, Культуру со скоше ного агара Хоттингера (или МПД) переносят на жидкую посевную средуследующего состава, :. Глюкоза техническая 2,0 Дрожжевой экстракт 1,0 Nad0,25 Пептон1 ,0 Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 150 мл среды, на качалке с 220250 об/мин в течение 18-24 ч при 28 , Инокулят передают в ферментационную среду в количестве -боб, Состав ферментационной среды, %: Глюкоза техническая 10,0 БВК2,0 МНдМО 2,0 СаСОд2,0 Вода водопроводная, рН 7|2 доводят до стерилизации 5NKOH. Глюкоз в виде kQZ-Horo раствора стерилизую совместно с мелом при 0,5 атм 30 ми Процесс ферментации проводят методом глубинного культивирования в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащих 30 мл среды, на качалке 220-250 об/мин или в металлических ферментерах емкостью 30 л при расхо де воздуха 1 об, на 1 об, среды в 1 мин и скорости мешалки 00-500 об/ми Оптимальная аэрация для указанной среды в колбах обеспечивается при скорости растворения кислорода 2,03,0 г 0 л/ч. Оптимальная температура процесса биосинтеза инозина ЗО-ЗТ С, При оптимальных условиях ферментации в колбах максимальное накопление инозина наблюдается на 96-120 часу. Уровень образования инозина составляет 1011 г/л,.При культивировании штамма ЦМПА В-1321 в условиях ферментера выход инозина составляет 11,0 г/л на 65 часу, П р и м е р 2, Штамм продуцент, условия ферментации те же, что и в примере 1. Отличие состоит в составе ферментационной среды. Состав ферментационной среды, %: Глюкоза техническая Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N КОН. Содержание инозина на 120 ч ферментации в колбах составляет 1112 г/л. Примерз. Штамм продуцент, условия ферментации те же, что и в примере (. Отличие состоит в составе ферментационной среды. Состав ферментационной среды, %: Гидрол 15,0 БВК1,3 Кукурузный экстракт 1 ,5 NH4NO 2,5 СаСОс Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N КОН, Содержание инозина на 96-120 ч ферментации в колбах составляет 1012,0 г/л соответственно. Пример. Штамм - продуцент, условия ферментации те же, что в примере 1. Отличие состоит в составе ферментационной среды. Состав ферментационной среды, : Сахар 10,-О БВК2,0 NH.NO, СаСОа Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N КОН, Содержание инозина на 120 ч ферментации а колбах составляет 10,0 г/л. Штамм Вас. subtil is ЦМПМ В-1321 вляется новым более активным штамMOM, синтезирующим в процессе глубинной ферментации инозин в количестве 10-12 г/л за 65-120 ч на средах с доступным не пищевым сырьем. Формула изобретения Штамм Bacillus subtil is ЦМПМ В-1321 - продуцент инозина. Хранится в коллекции Всесоюзного научноисследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-1321 Культурально-морфологические при знаки. Спорообразующая палочка размером ,6-0 ,8 |J . Размер спор 1,0-1,,6-0, . Мясо-пептонный агар. При инкубации в течение 8 ч при 37°С, образует желтовато-серые круглые колонии в центре выпуклые, диаметром 2,53,0 мм, с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность шероховатая, морщинистая, матовая, Мясо-пептонный бульон. При инку бации Q течение 24 ч при без встряхивания наблюдают помутнение среды, на поверхности образуется морщинистая, сухая пленка, при вст хивании на качалке - сильное пому нение среды. При стоянии образуется осадок. 6 Агаризованная среда Хоттингера. При инкубации в течение 48 ч при 37°С образует желтовато-серые круглые колонии, в центре выпуклые с бепмм оттенком, диаметром 2-2,5 мм с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность морщинистая, шероховатая, матовая. Синтетическая .среда с минеральным азотом. Рост отсутствует. Ломтики картофеля. Пигмента не образует. Имеет матовую, сухую морщинистую поверхность. физиолого-биохимические признаки. Грамположительный, аэробный, рост поверхностный. Желатину разжижает. Крахмал гидролизует. Молоко пептонизирует и подщелачивает. Отношение к источникам углерода. Усваивает: глюкозу, галактозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, маннозу, рамнозу, сахарозу, глицерин. При росте на синтетической среде нуждается в аденине тирозине,гистиОптимальный выход инозина 10-12 г/л за 65-120 ч ферментации. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 382676. кл. С 12 D 13/06, 1973,