Способ выращивания вируса Советский патент 1978 года по МПК C12K9/00 

1

Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии.

Известен способ р.азмножения вирусов в культуре клеток, заключающийся в том, что для выращивания вируса используют суспензию клеток культуры, которую в свою очередь получают посредством непрерывного культивирования клеток 1.

Однако известный способ не обеспечивает непрерыв-ного получения вируса в повышенной концентрации.

С целью непрерывного получения вируса в повыщенной концентрации в процессе выращивания непрерыВНО добавляют неинфицированную клеточную культуру в логарифмической .фазе роста в концентрации 0,8 - 1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3 - 0,7 объема вирусной суспензии в сутки.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. В ферментере размножают клетки Hela в объеме 600 мл до концентрации 550 тыс. жизнеспособных клеток в 1 мл при температуре 37°С и скорости вращения мещалжи от 200 до 300 об/мин. Для размножения клеток используют среду Бирча следующего состава:

Соли, мг/л:

NaCl5900

КС1400

200 2500

500 1

0,1 1 1

0,5

2,0 ОД 1,0 1,2

а 1,2 1,0 2,0 0.2

рохлорид

орид

10,0 1,0

20,0 г/л:

450

180

180

99

175

30

70

200

150

1-Алании90

1-Глицин15

1-Серии20

1-Триптофан20

1-Цистин75

1-Тирозин70

1-Глютамин100

1-Глютамин Na1530

Дополнительные компоненты, мг/л:

Глюкоза2000

Феноловый красный10

Среду Бирча обогащают 1 % сыворотки эмбриона коровы, свободной от антител и ингибиторов к вирусу парагриппа 3 типа. Клетки заражают путем внесения 5 мл вируса парагриппа 3 серотипа (штамм у 2932), имеющего инфекционный титр 10 ТИД5о/мл (множественность инфекции 1 ТИДбо на 60000 клеток).

Через 7 суток культивирования, когда содержание инфекционного вируса в культуральной жидкости составляет 7,5 lg/0,5 мл, содержание гемагглютининов 1:8 и процент зараженных клеток 51% .при снижении жизнеспособности популящии до 30%, подключают перфузионную связь с хемостатом. К этому моменту концентрация жизнеспособных клеток в хемостате составляет 960 тыс /мл, объем равен 500 мл. Для размножения клеток в хемостате используют среду Бирча с 2% сыворотки эмбриона коровы. Резервуар подачи среды содержит среду Бирч.а с 1% сыворотки эмбриона коровы. Скорость подачи среды, осуществляемая при помощи перистальтических насосов по липии в хемостат, составляет 240 - 360 мл/сутки при температуре 4°С.

Через сутки содержание жизнеспособных клеток в ферментере увеличивается до 55%,

концентрация инфекционного вируса возрастает в 10 раз.

В течение последующих 8 суток концентрация клеток в хемостате колеблется от 0,8

до 1,2 млн/мл, содержание инфекционного вируса в вирусном ферментере, составляет от 7,45 до 9,5 Ig ТИДбо/мл, титры гемагглютиниHOiB от 1:8 до 1:16, процент жизнеспособных клеток от 40 до 65%, а содержание клеток,

поддерживающих репродукцию вируса (с положительной гемадсорбцией), колеблется от 56 до 90%.

Использование предлагаемого способа обеспечивает возможность непрерывного получения вирусной биомассы, а также повыщение концентрации инфекционного вируса в 100 раз по сравнению с результатами, получаемыми при суспензионном культивировании.

20

Формула изобретения

Способ выращиваиия вируса, например па25 рагриппозного, в культуре клеток, отличающийся тем, что, с целью непрерывного получения вируса ;в повышенной концентрации, в процессе выращивания непрерывно добавляют неинфицироваяную клеточную культуру 30 в логарифмической фазе роста в концентрации 0,8 - 1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3 - 0,7 объема вирусной суспензии в сутки.

35Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

1. Сергеев А. Размножение вирусов животных в культуре ткани. М., 1966, с. 230.