Реактив для ранней диагностики беременности и способ приготовления реактива Советский патент 1978 года по МПК G01N33/16 

(54) РЕАКТИВ ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ И СПОСОБ-ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКТИВА эритроциты:антисыворотка 2,5х10 причем это отнесение соответствует, например, количеству антисыво ротки, выраженному в сухом экстракте, от 6600до 7500 мкг. Титрование антисыворотки осуществляют из эритроцитов, сенсибилизированных к ХГГ. Титр является переменнь в каждом случае, именно и служит основанием для осуществления разбавления. На пробирку испольэуют 0,2-0,4 мл суспензии и 3-6% эритроцитов, сенсибилиэированных к ХГГ, 0,3-0,6 мл раст вора антисыворотки. Буфер регулирует значение рН, моча имеет рН 5,8 с физиологическими изменениями 5,2-6,4. Реакция ингибирования агглютинации происходит в наилучших условиях, если рН близок к нейтральному. Поэтому необходимо использовать буфер, чтобы рН было в пределах 6,5-7. Для этого реактив должен содержать буфер с фосфатами натрия и-калия в количествах, Первичный фосфат калия 0,072 Первичный фосфат натрия 0,495 в моче кальций связан с белками и не имеет никакого влияния на реакцию, но небольшое количество свободных ионов кальция всегда присутствует, это количество быстро возрастает со старе нием мочи. Ионы кальция вызывают аггл тинацию эритроцитов.. Ес.ли моча имеет отрицательную реакцию (моча неберемен ной женщины не содержит ХГГ), результат останется отрицательным, так как агглютинация является как результатом отсутствия ХГГ,- так и наличия ион кальция. Если моча имеет положительную реакцию, то не должно происходить агглютинации, так как имеется наличие ХГГ, но будет иметь место агглютинаци вызванная ионами кальция, а реакция вместо отрицательной станет положительной, поэтому необходимо, удалить ионы KGLЛьция. Различные количественны анализы показали, что содержание ионо кальция может возрастать на необходи мое для проверки количество мочи до 30 мкг и выше, в то время как количе во 10 мкг способно помешать реакции. Для реактив.а ионы кальция удаляют путем перевода их в комплексное соед нение с натриевой солью зтилендиамин тетраацетата (ЭДТА) (на 2 молекулы воды). Для обеспечения надежности реакции, даже если моча не используе ся в течение малого времени, натриевую соль этилендиаминитетраацетата подают в избытке. Реактив содержит натриевой соли этилендиаминтетраацетата 0,4 мг. Динатрийфосфат, монокалийфосфат и натриевую соль этилендиаминтетраацетата вводят в виде раствора, количес во которого составляет 0,1-0,2 мл. Реактив готовят путем помещения суспензии эритроцитов в изотонический солевой раствор в пробирке, в которой суспензия заморожена, затем в это количество эритроцитов вводят замороженный буфер, который содержит замороженный этилендиаминтетраацетат, и поверх которого прибавляют раствор антисыворотки, который также заморожен, после чего все лиофилизируют. Соединение буфер-этилендиаминтетраацетат разделяет расположенные рдин над другим слои эритроцитов и сыворотки в целях предотвращения преждевре-. манной реакции между эритроцитами и антисывороткой. Состав буфер- -ЭДТА является изолятором обоих расположенных один над другим слоев эритроцитов и антисыворотки и три замороженных, расположенных таким образом один над другим слоя не могут реагировать между собой из-за их замороженного состояния, а лиофилиэация осуществляет переход твердых вещестя в газообразное состояние, при этом различные имеющиеся реактивы не могут взаимодействовать между собой. Предел чувствительности предлагаемого реактива должен превышать 1500 межд. ед. УСН на 1 л исследуемой мочи. Предлагаемый реактив обладает высокой чувствительностью и предотвращает преждевраменную реакцию меж,цу эритроцитами и сывороткой. Формула изобретения 1. Реактив для ранней диагностики беременности по наличию хорионгонадотропина в моче, содержащий лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрий - фосфат, монокалийфосфат и антисыворотку к хорионгонадотропину, от л ичающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, он содержит дополнительно этилендиаминтет-. раацетат натрия, причем компоненты пи«...„«„х держатся в следующих соотношениях. вес.ч. Лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадотропину зритроциты0,49-0,5 Динатрийфосфат Монокалийфосфат 0,07-0,075 Антисыворотка к хорионгонадотропину 6-8 Этилендиаминтет- раацетатнатрия 0,3-0,5 2. Способ приготовления реактива по П.1 путем лиофилизации, о т л ичающийс я тем, что, с целью

предотвращения преждевременной реак-та и этилендиаминтетраацетат натрия,

ции между эритроцитами и сывороткой,затем антисыворотка.

лиофилизацию компонентов производятИсточники информации, принятые во

послойно, 9 следующей последователь-.внимание при экспертизе:

ности: взвесь эритроцитов, затем раст-5 i. Acta endctfrino . 35, 261,

вор динатрийфосфата, монокалийфосфа-(1960 г).