Способ получения иммобилизованных нуклеиновых кислот Советский патент 1978 года по МПК C07H21/00 

Изобретение относится к способу получения иммобилизованных на нерастворимом носителе нуклеиновых кислот, которые могут быть использованы для афинной хроматографии ферментов и белков, образующих комплексы с нуклеиновыми кислотами.

В литературе описан ряд способов получения препаратов иммобилизованньтх нуклеиновых кислот при помощи ковалентного связывания с различными носителями .

При помощи указанных методов возможна иммобилизация как одноцепочечных нуклеиновых кислот (РНК или денатурированная ДНК), так и двуцепочечных,

Эти методы являются двустадийными: первая стадия - активация носителя или нукпеиновой кислоты, вторая - взаимодействие носителя с нуклеиновой кислотой.

Известен также 5 -триазиновый способ иммобилизации .нуклеиновых кислот, позволяющий осуществить ковалентное связывание.с носителем, представляющим собой полимер дексграна - сефадекс как

одноцепочечных нуклеиновых кислот (РНК или денатурированная ДНК), так и вдоль цепи нативной (двуцепочной) ДНК 2 . В соответствии с этим методом связывание производят следующим образом,

К носителю (сефадекс), отмытому водой и 0,1 М боратным буфером, добавляют раствор цианурхлорида в ацетоне. Активацию носителя проводят в течение

30 мин на холоду, стабилизируя рН добавлением 4 Н, NaOH. Активированный носитель промывают раствором ацетона, дистиллированной водой, боратным буфером и приливают раствор нуклеиновой

кислоты. Стадию связывания нуклеиновых кислот проводят при перемешивании в течение 16 ч. Для удаления непрореагировавших высокореактивных хлоридных групп цианурхлорида полученные препараты промывают 1 М аммиачныч буфером.

С помощью этого метода возможно получение препаратов, содержащих достаточно большое количество нуклеиновых кислот, превосходящее содпржание нукле