Способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты Советский патент 1975 года по МПК C07D51/50 

1

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты.

Известен способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты путем связывания ее с предварительно активированным гидрофильным носителем, например с полисахаридом, активированным цианбромидом или карбодиимидом.

Однако известный способ пригоден только для связывания денатурированной нуклеиновой кислоты.

С целью повышения содержания нативной ДНК предложено активировать носитель цианурхлоридом.

Получение водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты включает стадии активации носителя и связывания нуклеиновой кислоты с активированным носителем.

В качестве нерастворимого носителя обычно используют сефадекс G-75. К отмытому последовательно холодной дистиллированной водой и 0,1 М боратным буфером сефадексу G-75 добавляют цианурхлорид в ацетоне. Активацию проводят в течение 30 мин на холоду, стабилизируя рН. добавлением 4 н. раствора едкого натра.

Активированный сефадекс промывают раствором ацетона, дистиллированной водой и обратным буфером, после чего приливают к

нему раствор нативной ДНК. Стадию связывания нуклеиновой кислоты проводят при тщательном перемешивании. Для удаления непрореагировавших высокореактивных хлоридных групп цианурхлорида, полученные препараты промывают 1 М аммиачным буфером и хранят при 4°С.

Содержание нуклеиновой кислоты в полученных препаратах 50-70%.

10

Пример. 300 мг сефадекса G-75 мешируют дистиллированной водой, оставляют на ночь для набухания, промывают 0,1 М боратным буфером (рН 9,6) и добавляют 200 мг

цианурхлорида в 5 мл ацетона. Затем сразу

же прикапывают 4 н. раствор едкого натра до

стабилизации рН 11. Активацию проводят в

течение 30 мин при 10°С.

Активированный сефадекс отмывают ацетоном, дистиллированной водой, 0,1 М боратным буфером и добавляют 5 мл раствора нативной тимусной ДНК (2 мг/мл), выделенной но методу Бенинга с последуюш,ей очисткой по Мармуру. Далее смесь при тшательном неремешивании выдерживают 16 час при 37°С. Полученные препараты промывают последовательно 100 мл 1 М аммиачного буфера и 1000-1500 мл дистиллированной воды. Обычно содержание нуклеиновой кислоты

в полученных препаратах составляет 50-70%. 3 Предмет изобретения Способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты путем связывания ее с предварительно активированным ги- 5 4 дрофильным носителем, отличающийся тем, что, с целью по1вышения содержания нативной ДНК, носитель активируют цианурхлоридом,