Штамм -84 продуцирующий -лизин Советский патент 1978 года по МПК C12K1/02 C12D13/06 

Изобретение относится к микробиологи ческой промышленности и касается получения нового штамма -Bnevibactsiiium б ДЕ-84, продуцирующего Ь -ппизин. Известен штаммВ еУ«Ьас1ег «и5«бр 2Л используемый при производстве кормового концентрата U -лизина 1|. Недостатком этого штамма является его высокая, чувствительность к фагу (В, вызывающему лизис культуры в производственных условиях. Данные лабораторных исследований свидетельствуют о том, что фаг 0В с высокой эффективностью развивается на штаммеБ)еу Ьао1вКш «бр,22Л при культивировании как на твердой, так и в жидкой питательных средах, достигая титра 1.10 1.10 фаговых частиц в 1 мл среды. Чувствительность штаммаВ в vibaciep lH бр. 22Л к фагу 0В была причиной фаголизиса, наблюдавшегося в процессе производства и полностью подавляющего развитие культуры-продуцента и накопление L -лизина. Целью данного изобретения является создание такого штамма-продуцента, который был бы устойчив к литическому действию фага 0В и обладал бы повышенным уровнем накопления лизина. Штамм ДЕ-84 получен путем многоступенчатой селекции с применением мутагенных факторов из штaммaBt«evibacteпитйр.22Л. При этом в качестве исходной культуры при получении фагоустойчивого штамма был использован вариант СВ-8О, полученный из штаммаВгвУ4Ь01с1сfiuHt sp. 22Л в итоге .3-х этапов отбора с применением мутагенного фактора. При получении фагоустойчивой культуры клетки штамма СВ-8О обрабатывали раствором мутагена и отбор фагоустойчивых вариантов осуществляли методом реплик без контакта с фагом. После получения фагоустойчивого штамма С-88 был проведен один этап отбора на повышение продуктивности, в результате которого был получен штамм ДЕ-84. Ниже приведена схема селекции штамMaBfevibactetiu m бр.ДЕ-84. BrevibacteHuw Sp. 22Л Ч ) три этапа отбо4 ) ра на повышение if ) прюдуктивности Штамм СВ-8О Штамм С-88 - отбор на фагоустойчивость Штамм - отбор на повышение продуктивности. В отличие от штамма 22Л на мутантном штамме ДЕ-84 фаг 0В практически не развивался (таблица). Ферментацию проводили в колбах объемом 75О мл при ЗО-32с на регламентной производственной среде следующего ««хп-ава, %: меласса - 20,0; кукурузный экстракт - 2, 3,0; 0,1; мея - 1,0; рН 7,3. Предлагаемый штамм ДЕ-84 в указанных условиях на 72 часа ферментации образует в среднем 36,0 г/л лизина, исходный штамм 22Л - 31,3 г/л лизина. Кроме того, в присутствии фага 0В культура штамма 22Л полностью лизировалаоь и t,-лизин не образовывался, в то время как штамм ДЕ-84 в присутствии фага накапливал U -лизин до 36 г/л. Предлагаемый штамм ДЕ-84 отличается от исходного штамма не только фагоус.тойчивостью и уровнем накопления лизина, но и рядом физиологических и морфологи- ческих признаков. Выход лизина и развитие фага 0В на тельвого штамма и фагоустойчивых шта средние Способ получения U -лизина с примене нием штамма ДЕ-84. П р и м е р . Культуру штаммаВге Ь01о1еииП1 s ДЕ-84, выращенную при в течение 24 часов на мясо-пептонном агаре, петлей высевают в колбу (емк. 750 мл), содержащую 30 мл посевной среды следующего состава, %: меласса - 16,0; кукурузный экстракт - 5-6 по техническому Becy;HHjCg- 2,5; - 0,1; CaCOg - 1,0; рН 7,О-7,5 доводят после стерилизации стерильным раствором КОН. Колбы помещают на круговую качалку (240 об/мин) и выращивают посевной материал в течение 18-24 часов при 30-32 С. Приготовленным посевным материалом в количестве 10% засевают ферментационные колбы (емк. 750 мл), содержащие ферментационную среду следующего состава, %: меласса - 20,0 (10% по сахару); кукурузный экстракт - 2,5; МНдСЙ- 3,0%; KH2POV- 0,1; CaCOj 1,0; рН до 7,3 доводят после стерилизации стерильным раствором КОН. Колбы помещают на круговую качалку (240 об/мин) и проводят ферментацию в течение 72 часов. По истечению указанного времени определяют концентрацию U -ли4 зина (методом электрофореза или бумажной хроматографии в системе растворителей бутанол, уксусная кислота, вода - 4:1:1), которая достигает 37,0 г/л. ментационной среде у фагочувствиBnevi bacteГ ium ар. е).

Формула изобретений ШтаммБ 2У|Ьс11с1егш«1ЭрДЕ-84, продуцирующий L -лизин. Хранится в музее культур ВН 1Игенетики, регистрационный .Me 13-1338. 55 Морфология. Клетки овальные, размербм 1,2x2,5 мк, бесспоровые,.граммположительные, неподвижные. Культуральные и физиологические признак. /.ясо-пептонный агар (МПА). На 7-в сутки роста образует колонии диаметром 3,5-4,0 tftA, круглые с гладким крае в приподнятым в втаё конуса центром, С-2-3 неглубокими кондевтрическйми кладками, оранжевого цвета. Посев штрихом. На 2-е сутки рост умеренный, край гладкий, поверхность глад кая, блестящая, профиль плоский, цвет оранжевый. Среда Гловера. На 7-е сутки образует колонии диаметром 1,2-1,5 мм, круглые с глaдкl v{ краем, профиль сферический, оранжевого цвета. Посев штрихом. Рост умеренный, край гладкий, поверхность гладкая, блестждая профиль плоский оранжевого цвета. Для роста на среде Гловера необходим биотип, тиамин, гомосерин (или метионин и треонин) и гистидин. Отношение к источникам углерода. Хорошоассимилирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, более слабо ксилозу, этиловый спирт, ацетат натрия или аммония. Не использует лактозу. Отношение к источникам азота. Ассимилирует хлористый аммоний, сернокислый аммоний, азотнокислый аммоний и мочевину. .Отношение к фагу ОВ. Устойчив к фагу 0В, в присутствии большого количества фага (10® частиц/мл) развивается нормально и продуцирует лизин до 4О г/л. Выход лнзвна на стадии ферментации в отсутствии фага на 15-17% больше, чем у производственного штамма. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство №240644, кп. С 12 К З/ОО, 1968.