Сополимеры -винилпирролидона с люминесцентными метками в качестве носителей физиологически активных веществ Советский патент 1978 года по МПК C08F226/10 

люминесценции затруднено из-за собственного свечения биологических объектов Поэтому обнаружение в организме водорастворимых модифицированных сополимеров ВП с помощью люминесцентной техники оказалось затруднительным. Предлагаемые водорастворимые сополимеры ВП-КА и ВП-МА, модифицированные люминесцирующими аминопроизвод ными акридина - 3,6 -диамино-2,7-диметилакридингидрохлоридом (акридиновым жел1ым) и лактактом 2-этокси-6,9диаминоакридина (риванолом), имеют в водном растворе при концентрации 0,1-0,4% эффективную зеленую люминесцентную с максимумами спектров люми несценции 5ОЗ и 505 нм соответственно (возбуждение при Я 436 нм) Реакцию конденсаши люминофоров с сополимерами ВП-КА и ВП-МА проводят при комнатной температуре или при нагревании в растворе воды, спирта или диметилформамида в течение 6 час при молярном соотношении КА (МА): люминофор . При проведении реакции в воде реакционную смесь подвергают диализу для удаления непрореагировавшегс люминофора и продукт выделяют с помощью лиофильной сушки. В случае примене1шя С1шртовых или диметилформамидных растворов продукт реакции выделяют из раствора осаждением диэтиловым эфиром, отделяют диализом от при меси непрореагировавшего люминофора и подвергают лиофильной сушке. Первичным контролем ковалентного присоединения люминофоров к полимерной цепи и полноты очистки продукта реакции от примесей непрореагировавшего люмино1{)о ра являлась гельхроматография, а оконча тельным - величина са епениполяризации люминесценции (Р) водных растворов полимеров. При использовании сополимера ВП-КА люминофоры, присоединяются к полимерно цепи азометиновой связью; в случае сопо лимера ВП-МА - амидной связью. Люминофоры вводятся в полимерную цепь в ко личестве 0,09-0,38 вес.%. Характеристи ческая вязкость полимерных производных люминофоров практически не отличается от характеристической вязкости/ г7 j исход ных сополимеров ВП. При-мер.К раствору О,5 г сополимера ВП-КА, содержащего 9,0 вес. (13,6 мол.%, .т.е. О,О45 г) КА, с г О,11 (вода, 2О°С) в 50 мл дистиллированной воды добавлядат 0,04 г растертогов порошок 3,6-диамино-2,7-диметил акрндингидрохлорлда (акридинового жел694 того) (исходное молярное отношение К А: люминофор 5:1, модуль ванны 1ОО:1), Реакцию проводят при перемешивании при 50 °С в течение 6 час в токе инертного газа. Продукт реакции подвергают диализу в дистиллированной воде при перемешивании в течение 10-15 дней, выделяют с помощью лиофильной сушки, окончательно очищают от непрореагировавших люминофоров методом гелевой хроматографии водного раствора полимера (1О-2О мг/мл) на сефадексе D 25 и снова лиофилизуют. Полученное полиМерное Шкффово основание акридинового желтого -«. тройной сополимер кротогнового альдегида, W -винилпирролидона и кротонилиден-3,6-диамино-2,7-диметилакридина - слабо-желтый порошок, раст воримый в воде, метаноле и диметилформамиде, нерастворимый в бензоле, четыреххлористом углероде, петролейном и диэтиловом эфирах. Содержание связанного люминофора в полимере по данным спектрофотометрии 0,38%; ,4; П 13,6; )х 0,17;( 0,11 ( 20°С); молекулярная масса (М) 2ОООО. Величина поляризации люминесценции водного раствора полимера в отсутствие непрореагировавшего люминофора Р - 12% (после второй гельхроматографии). Максимум полосы люминесценции при 503 нм, интенсивнобть зеленог-о свечения эффективная для водногс, раствора полимера концентрации 0,05%. Пример2. 1,Ог сополимера BnWVlA, содержащего 8,4 вес.% (9,5 мол.%, т.е. О,О84 г) МА, с Г« 0,45 (0,02 н.НС , 20°С) растворяют Б 27гО мл свежеперегнанного диметилформамида и добавляют 13,0 мл 0,1%-ного диметилформамидного раствора (0,013 г) 3,6-диамино-2,7-диметилакридингидрохлорида (исходное молярное отношение МА:люминофор 1:1, модуль ванны 40:1). Реакционную смесь иагревают 6 час при 50 С при перемешивании в токе инертного газа. Продукт реакции осаждают из раствбра диэтилшым эфиром и далее поступают, как в примере 1. Подученный полимерный амид акридинового желтого - тройной сополимер малеинового ангидрида, W -винилпирролидона и мономалеиноил-3,6-диамино2,7-диметилакридина- желтый аморфный порошок, растворимый в воде, метаноле и диметилформамиде, нерастворимый в бензоле, четыреххлористом углероде, петролейном и диэтиловом эфирах. Содер;: ан 1е связанного люминофора в

полимере 0,09%; Ж 90,5; Н 9,5; X 0,04;. г 0,44 (0,О2н. HCf , 20°С); М 15ОООО, Величина поляриза-ции люминесценции водного раствора полимера в отсутствие непрореагирсжав- шего люминоформа (после второй гельхроматографии). Максимум полосы люминесценции при 5ОЗ нм, интенсивность зеленого свечения эффективная для водного раствора полимера концентрации 0,3%.

П р и м е р 3. 0,38 г сополимера ВП-КА, содержащего 9,0 вес.% (13,6 мол.%, т.е. О,О34 г) КА, 0,11 (вода, 2О°С) растворяют в2Омл метилового спирта и смешивают с раст- вором О,О35 г лактата 2-этокси-6,9- диаминоакридина (риванола) в 36 мл метанола (исходное полярное отношение КА: люминофор 5:1, модуль ваины 147 : 1). Смесь растворов пёремешивают 6 час при 20 в токэ инертного газа. .Продукт реакции осаждают из метанольного растъора диэтиловым эфиром и далее поступают, как в примере 1. Полученное полимерное Шиффово

основание риванола - тройной сополимер кротрнового альдегида, М -винилпирро

лидона и 2-этоксикротонилиден-6,9 диамино-акридина - аморфный желтоватый порошок, растворимый в воде, метаноле и диметилформамиде, нерастворимый в бензоле, четыреххлористом углероде, петролейном и диэтиловом эфирах. Содержание связанного люминофора в полимере по данным спектрофотометрии 0,27%; Ш 86,4; 13,6; х О,14; ,ll (, 20°С); М 20000. Величина поляризации люминесценции водного раствора полимера в отсутствие непрореагировавшего люминофора (после четвертой гельхроматслграфии). Максимзгм полосы люминесценции при 5О5 нм, интенсивность зеленого свечения эффективная для воаяаго раствора полимера концентрации О,1%.

П р и м е р 4, 0,54 г сополимера ВП-МА, содержащего 6,8 вес,% (7,6 мол.%, т.е. 0,037 г) МА, c|ttj O,2 (0,2 н, нее , ) растворяют в 2Ом свежеперегнанного д иметилформамида и добавляют 34 мл О,1%-ного ;.иметилформамидного раствора (О,О34 г) лактата 2-этокси-6,9-диаминоакридина (исходное молярное отношение МА: люминофор 4:1, модуль ванны 100:1). Реакционную смесь нагревают в течение 6 час .

при 50 С с перемешиванием в токе инер ного газа. Продукт реакции осаждают из диметилформамидного раствора диэтиловым эфиром, очишают и вьщеляют, как в примере 1. Полученный полимерный амид риванола - тройной сополимер малеинового ангидрида, Н -винилпирролидона и 2-э оксимономалеиноил-6,9-диами- ноакридина - слабо-желтоватый порошок, растворимый в воде, метаноле и диметилформамиде, нерастворимый в бензоле, четыреххлористом углероде, петролейном и ДИЭТИЛОВОК1 эфирах. Содержание связанного люминофора в полимере по данным спектрофотометрии 0,10%; ,4;И 7,6; х О,04; О,28 (0,02н. нее , 20°С); М 80ООО. Величина поляризации люминесценции водного раствора полимера в отсутствие непрореагировавшего люминофора (после второй гельхроматографии).Максимум полосы люминесценции при 5О5 нм, интенсивность зеленого свечения эффектиная для водного раствора полимера концентрации 0,1 %

Новые сополимеры ВП-КА и ВП-МА, полученные в результате ковалентного

присоединения аминопроизводных акридина (0,1-О,4%) и имеющие интенсивную

зеленую люминесценцию(,50 3- 5О 5 нм достаточно хорошо отличающуюся от аут флуоресценции биологических объектов (жидкостей и тканей), могут быть использованы в качестве полимеров - носителей для присоединения к ним физиологически активных веществ. Кроме того, дополнительным эффектом изобретения является физиологическая активность самих предлагаемых полимеров.

Известно, что акридиновый желтый и риванол сами являются физиологически активными соединениями (бактерицидное действие). Люминесцирующие сополимеры, синтезированные на основе сополимеров ВП-КА и ВП -МА, проявили противовирусную активность в отношаннц вируса клещевого энцефалита в опыте на белых мышах. Так, после заражения мышей вирусом клещевого энцефалита в дозе 1ОО Л ел выживаемость мышей, которым вводили полимерное азометиновое прсжзводное акридинового желтого (содержание последнего в полимере 0,1%) в дозе 16,6 мг/кг, составляет 8О%, а в контроле - 45%.

Формула изобретения Сополимеры Ц -винилпирролидона с. люминесцентными метками общей (A)r-(-to.-iH .

oN.

(

,. :..л.., ..-: .

zS2

8

HS

(iH,

I

iH-).,

CH

H.

II

N-K

-i H-CH-br..j,-f(|H-(|Hij , H00(- i 0

0HN-K

,4-92,4 мол.%, tl 7,6-13,6моп.%; X 0,O4-O,17 мол.%, с молекулярной массой 2,0-10 - 1,510,

в качестве носителей физиологически активных веществ.