-А цилированный пентапептидамид или его динатриевая соль, обладающие способностью природного гастрина стимулировать выделение желудочного сока Советский патент 1978 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 A61P1/14 

дом, отупейчатым наращиванием цепи ме годом активированных Ф-пириданальдокси мстых эфиров N -ашишрованных аминок лот , начиная с фениламида. Все реа 1ШИ образовання nenimiHOfi связи проводя в оонотипвых условиях, побочные продукт и И9бь1ток адилирующего агента по оконч йив реакции попностыо удаляют экстрахцвей реакшюнной смеси кислыми к осною водными растворами. П р в м е р. Органические растворитеЛ1г упарввали на роташЕонном истшрнтеле при остато шом давлении 1215 . ст. в температуре бани до-4от;. Температуры плавлешш (разложения) определяли в открытых капиллярах (без коррекииа), углы вращения на поляриметре Перкин Элмер (модель 141). ИК-чздектры образцов снимали иа прнбо peUR-flO фирмы Карл Цейсе (ГДР). Для хроматографкческого анализа испсаш эовали бумагу ФН-3 (ГДР) в системе н бутанол- уксусная кислота вода (4:1:5). Злектрофоретический анализ на. бумаге Фильтрак ФН-16 (ГДР) проведен в буферных системах: 30% уксусная кислота (рН 1,9) при поте циалыюм градиенте 18 в/см и пиридиН ацетатный буфер (рН-5,0) при 9 в/см, время - 1,5 час... Электрофоретическая подвижность соединений ( ) охарактеризована по отношению к гистидину, Пятаа на хроматограммах и электрофореграммах проявляли нишгидрином, 1 активом Эрлиха и pactBopOM перманга ната калия в разбавленной серной кислоте. Образцы для элементарного анализа были высушены в течение Ю час в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. 4-1тридинальдоксимовые эфирыМ-аци/шмввокислот. 4 пиридинальдоксимовые эфиры N -трвт ВОС-(й-п-нитробензилового эфира )-аспарагиновой кислоты,.N -трет ВОС-лейцина, W «трет-ВОС-триптофана и fj -карбобензоксисаркозина получены согласно f4j} аналитические данные, характеризукяцие полученные соединения, приведень в табл.1.

со Я

к ч ю а Ь

N -трет-бутилоксикарбонил-аспартил, -{Ji -п-нитробенаиловый эфир)-фенклаланил-амид,

К суспензии 1,0 г гидрохлорида фенилаланил-амида в 15 мл тетрагидрофу- s рана добавляют 0,69 мл триэтиламина, 2,4 г ( {4-пиридинальдоксимового); J5 п-нитpoбeнзилcввoгo эфира N -трет-бутилоксикарбонил аспарагиновой киСЛо1Ы и О,3 мл уксусной кислоты, пере- 10 мешивают в течение часа и оставляют на 16 час при кмкгаатной температуре. Реакционную смесь выливают в 5О мл волы, экстрагируют 5О мл этиланетата/Органический слой последовательно IS : прокльшают 3 X 2О мл 5% раствора биг суяьфата калия, 1x20 мл воды , Зх2Омл % раствора бикарбоната натрия и 1x20 :МЛ воды. Органический слой наьюушивают над безводным сульфатом магния. 20 упаривают. Сухой остаток кристаллизует из петролейного эфира. Выход 1,55 г (60%). Т/пл. lS8 160°C,d(J 21,0°С (с 1,0, тетрагидрофуран)

Найдено,%: С 58,56; Н 5,93;25

ft/10,31.

CaaHjo Oe

ВычисленоД: С 58,4О; -Н 5,84; /V 10,91.

/У-трет бутилокаикарбонш1--лейыш1 аспартил (-п-нитробенаиловый эфир)фе ниШпанйн-амид,

Растворяют 2,98 .rBOS-Asp(OBzeNOp-PheNHL, в 15 мл трифторуксусной кислоЬл, выдерживают 20 мин при комнатной пературе, упаривают в вакууме. К остатку добавляют 50 мл дизтилового эфира, вещество отфильтровывают и высушивают BajsyyMHOM эксикаторе.

40

Полученное вещество сусдендирзлот в Ю мл тетрагидрофурана и нейтрализуют 0,8 мл триэтиламрша и -добавляют 2,5 г 4-пиридинальдоксимового эфира N -Tpeiv бупшоксикарботшллейшша и 0,30

уксусной кислоты и оставляют на 16 час при комнатной температуре. Выделение продукта аналогично описа1шому выше, Получают 3,0 г {74%).Т/пл. 167-16 0, ,7oC (с 1,0 тетрагндрофуран). Найдено,%: С 59,69; Н 6,66;.Л/11,00

Вычислено,%: С 59,63; Н 6,63; /VII,15...

Л -трет бутил оксикарбонил-триптофил-лейхшл-аспартил (J п-нитробензиловый эфир )-фенил ал анил-амид;

Рлстврршот 2,7 ri oC-Leu-As-gBz.eNO2)-P1ieNH2)B 10 Mrf трифгоруксуснсй

кислоты, выдерживают 2О мин при комнатной температуре, упаривают в вакууме. Костат ку добавл5пот 5О мл диэтйлового эфира, вещество отфильтровывают и высушивают в вакуумном эксикаторе над гидроокисы(: калия.

Полученное веш.ество суспендируют в 2,0 мл тетрагидрофурана, добавляют 1,1м триэтиламина и упаривают полученный раствор в вакууме. Остаток растворяют в 2О мл трагидрофурана, добавляют 2,43 г 4-пиридинальдоксимового эфира /V -трет бутйлоксикарбокарбонилтрнптофана, 0,6 мл уксусной кислоты и вы держивают 16 час при комнатнсй т;емпературе. Выделение продукта аналогично описанному выше. Питучаюр 2,7 г (81%). Т„ пл. 169-172°Cfc7(7.29,2 (с 1,0 тетрагадрофуран).

Найдено,%: С 60,89; Н 6,59; /V 11,96,

.

Вычнслено,%: С 60,75Н 6,44; N12,02.

-ка{збобензоксисаркозип:-триптсфил-лейщ1л аснартил (.|1 -п-нитробензиловый эфи р)-фехшл ал анил-амид .,

Растворяют 2,6.2 г БОС-Тгр-Leu-Asp COBz НО) - Phe NHgB 4% растворе меркаптоэтанола в трифторуксусной кислоте, выЦ держивают 10 мин при комнатной температуре и упаривают в вакууме. К остатку добавляют 30 мл диэтилового эфира, BemeciBO отфильтровывшот и высушивают в вакуумном эксикаторе.

Полученное вещество суспендируют Б 25 мл тетрагидрофурана, добавляют . 0,83 мл триэтиламина и упаривают чегшый раствор в вакуу,«гв. К остатку добавляют 2О мл тетрагидрофурана, 1,47 г 4-пиридинальдоксимового эфира карбобензоксисаркозина и 0,,3 мл jTccycHOE кислоты и выдерлшвают 16 час при комнатной температуре. Выделение npojoyKTa азшлогично описанному вьпне. Получают 2,56 г (96%).- Т. пл. 169 175°Cfof35 24,8°C (С 1,О диме-галформамид).

Найдево,%; С 55,89; Н 5,69; N10,77.

Вычислено,%: С 56,93| Н 6,08;

N11,20.

Сарк озил-триптскЬил-леймял-аспартил фейН 1апаии ам ки

Растворяют. 1,14 г Z-Sosr-Trp-Leu-Asp (OBzeHC)Phe N«2 в 20 мл смеси метанолуксусная |сис}1ота-вода (6:1:1), добавляю палладиевый катализатор и гидрируют пр атмосферном давлении в течение 1О час. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, к остатку добавляют 5 мл н-бутанопа, растирают и отфильтрсжьшаю Вещество на фильтре промывают 5 мл н-бутанапа и ЗО мл диэтилсшого 1ефира Выход 0,75 г (82%УE 0,58. (рН 1,9 0,52 (рН 5,0).Rf 0,70,, {с 1,О уксусная кислота). Найдено,%: С 53,76; Н 7,12; Л/12,9 CjjHi j/ViOf 5Н2.0. Вычислено,%: С 53,6; Н 7Д8;М13,2 Сукцинил-саркозил-триптофил-лейиил-аспартил-фенилаланил-амид 1,. . Растворяют 0,325г 5af-Тгр-Leu-As РЪе N«2 в 1О мл пиридина и добавляют 0,О7О г янтарного ангидрида. Реакционную смесь выдерживают 16 час при ком натной температуре, растворитель упаривают, к остатку добавляют 15 мл диэти лового эфира, растирают и отфильтровывают. Вещество на фильтре промывают 1О мл эфира и высушивают на воздухе. Полученное вещество растворяют в 2О мл 1% раствора бикарбоната натрия, фидьтруют фильтрат подкисляют 6% раствором б сульфата калия до рН 3. Отфильтровывают вьшавшее в осадок вещество, промывают осадок на фильтре водой и высушивают в эксикаторе над фосфорным ангидридом и гидроокисью калия. Получают: 0,318 г (94%) ,32 (рН 1,9)Е„,-бО,32 (рН 5.0). RfO,83. 32,9 (с 1,1 диметилформамид). Найдено,%: С 57,32; Н 6,38; N12,43; C3lH4 Wr«mHi.O Вычиспено,%: С 57,88; Н 6,43; N12,77. Динатриевая соль сукшшил-саркозил триптофил-лейцил-аспартип фенилаланил-амида, Растворяют 0,255 г5ос. iLeu-Asp-ptieNH-H О,057 г бшшрбоната трия в 5 мл воды, раствор фильтруют и .фильтратпромывают5 мл воды. Объединенные фильтраты лиофилиэируют, полученный продукт высушивают в эксикаторе. Получают 0,3 г слегка превышает теоретический) .:)(J 34,3°С (с 1,). Найдено,%: С 5О,ОЗ; Н 6,11; /Vll,07. C3 H 5V O o/Vci25HaO; Вычислено,%: С 5О,28; Н 6,27; Л/11,09. Опыты по определеш1ю биологической ктивности проводили по нзвесшым моодикам. Биологическую активность сукинилVc арк озил-триптофил-лейцил-ас партил-фенилалан шамид и его динатриевой соли оцёнивапи по способности соединений впиятьна киспотообразоватепьную функцию жапудка . Показателями же пупочной секреции спужиликопичество и общая киспотнсхгть желудочного сока, выделившегося из фистулы Басова, вставленной оперативным путем в желудок до опыта. Данные вещества вводили ненаркозированным кощкам с желудочными фистулами парентерально. Активность соединений определяли по четырехточечному методу в процентах по отнгаиенюо к стандарту. В качестве ста здарт«(яго препарата использовали синтезированный в лаборатории пептидов ИОС АН Латв, ССР с-терминальный пептидамид гастрина трет-бутнлоксикарбсйшл-fo а панин трйптофил-метионил-аспартил-фенилапанинамид (препарат пенгастрин), который предварительно был стандартизован по отношению к биологическ(1у стандарту Human Gastnn I TJesearcti Stosndacd 68/439,D vision of BioEog-icoie St0nddfds ,Nat Just-iof Wed- Research, Eng-Coind. Опыты проводили в августе, сентябре. В каждом опыте использовали две дозы (большую и маленькую) стандарта и две дозы (большую и маленькую излучаемого соединения. Желудочный сок собирали каждые 15 мин в течение 1 час послеподкожного введения препарата. В каждой пробе измеряли выделенное количество сока в миллилитрах. После определения количества соляной кислоты в аликвотной части пробы вычисляли обшее количество соляной кислоты в пробе в миллиэквивалентах. Выделенное количество соляной кислоты в миллиэквивалентах в течение 1 час под влиянием изучаемого препарата сравнивали с соответствующим показателем, полученным на данной кошке в тех же условиях при введении стандарта,. Влияние динатриевой соли 5 ис-Son -Trp-Leu- sp-PheNH Ha кислотообразовательную функцию желудка кошки определяется следующим образом. Активность соединения определяли по формуле ак-гавность,% - -Р-ЮО