Способ количественного определения гардоны и его метаболитов Советский патент 1979 года по МПК G01N31/08 

Изобретение относится к аналити еской химии, а именно к способам количественного определения гардоны-транс-изомера 2-хлор-1-(2,4,5-трихлорфенил)-винилдиметилфосфата и его метаболитов. Цис-изомер-гардоны: 2,4,5-трихлорацетофенон (ТХАФ); 2,4,5-трихлорфенилэтанол-1 (ТХФЭ); 2,4,5-трихлорфенацилхлорид (ТХФХ) ; 2,4,5-трихлорфенил-2-хлорэтанол-1 (ТХХФЭ). Известен способ количественного определения гардоны, основанный на его способности поглощать УФ-свет п длине волны 250 нм 1. Недостатком способа является невозможность обна руживать метаболиты в присутствии гардоны. Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения гардоны и его метаболитов, заключаю щийся в обработке анализируемой про бы 30%-ным раствором ацетона в гексане, отделении и упаривании гексан вого слоя, добавлении к остатку аце тонитрила, отделении ацетонитрилово слоя, добавлении к нему воды, затем гексана, отделении и упаривании ;гексанового слоя, и хроматографировании остатка 2. Недостатком способа является невысокая точность, т.к. не достигается полное извлечение ТХФХ и ТХХФЭ из растительных, проб, обусловленное потерями .веществ при перераспределении их из гексана в ацетонитрил и длительность определения.. Целью изобретения является повыщвние точности и сокращение времени определения. Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения гардоны и его метаболитов, заключающимся в обработке анализируемой пробы диметилформамидом, водой, гексаном, отделении и упаривании гексансвого слоя и хроматографировании остатка. Отличительным признаком способа является использования в качестве органического растворителя диметил- . формамида. Пример. В 4 параллельных пробы яблок по 50 г каждая вносят по 5 мкг гардоны, 2 мкг цис-изомера гардоны, 0,5 мкг 2,4,5-трихлорацето.фенона (ТХАФ), 0,5 мкг 2,4,5-трихлор3 . фенилэтанола-1 (ТХФЭ), 0,5 мкг 2,4,5-трихлорфенацилхлорида (ТХФХ) 0,5 мкг 2,4,5-трихлорфенил-2-хлорэтанола-1 (ТХХФЭ). Контролем служит проба из 50 г необработанных яблок. мелконарезанные яблоки переносят в колбы и встряхивают со 100 мл диметилформамида (ДМФА) в течение 2 ч Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительные воронки. Расти тельный остаток дважды промывают дополнительными порциями ДМФА по 15 мл. Фильтруют этот экстракт к основному экстракту, в делительные воронки к диметилформамидному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды, перемешивают, добавляю 40 мл н-гексана и встряхивают в течение 1 мин. После отстаивания отде ляют гексановый слой в сухую чистую колбу. Экстракцию анализируемых веществ из воднодиметилформамидного слоя проводят еще дважды, используя каждый раз по 40 мл н-гексана. Гексановые экстракты объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием, фильтруют через бумажный фильтр и упаривают гексан до 5-6 мл, используя ротационный пленочный испарител при температуре не выше 40°С. Переносят количественно остаток в проби ки с делениями. Доводят объем раств ра до 10 мл. Полученный раствор используют для ГЖХ определений. ГЖХ определение проводят на хроматографе Цвет-106 с детектором постоянной скорости рекомбинации с использованием стеклянной колонки (100 см X3 мм), заполненной хроматоном N-AW-TMDS (0,16-0,20 мм) с 5% ХЕ-60. Скорость газоносителя - азота особой чистоты 75 мл/мин, тем пература детектора 210°С, испарителя 210С, скорость продувочного газа (азота осч) 150 мл/мин. Определение ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ проводят при температуре колонки 145°С. опре деление гардоны и цис-изомера гардо ны проводят при . Шкала электрометра 210 а, потенциометр КСП-4 Для количественного определения хроматографируют анализируемые и Результаты определения гардоны и его 9 стандартные растворы с известной концентрацией веществ (1 мкг/мл гардоны и цис-изомера гардоны, 0,1 мкг/мл ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ каждого в гексане). В колонку хроматографа вводят 3-5 мкг стандартного раствора длч получения высоты пиков, близкой к анализируемым растворам. Проводят 3-4 параллельных определения для получения средней высоты пика. Все определения проводят в присутствии холостых контрольных проб экстрактов из яблок, не содержащих анализируемых веществ. На основе этих проб вводят поправку: где h - высота пика анализируемого раствора, ho - высота пика холостой контрольной пробы, 2 исправленная высота пика В данном случае высота пиковхолостой контрольной пробы для ТХАФ Ьоф2 мм, ТХФЭ h 0.мм, ТХФХ h 0 мм, ТХХФЭ мм, гардона h 0 мм, цис-изомер гардоны fi(,cp мм. Содержание препаратов в пробе (в мг/кг) вычисляют по формуле fljVlC.V t, v m где tl - высота пика стандартного раствора (мм); Нг - высота пика исправленная (мм) ; Л 2 Объемы стандартного и анализируемого растворов, видимых в колонку хроматографа (мкл) концентрация стандартного раствора (мкг/мл); V - объем экстракта анализируемой пробы (мл); |71- навеска яблок (кг) . В настоящем способе анализа величина холостой пробы не превышает 5% от минимально определяемой концентрации исследуемых веществ. Определение гардонн и его 5-ти метаболитов из яблок с помощью описанного способа дает следующие результаты, приведенные в таблице. метаболитов в яблоках

Гардона

Цис-изомер гардоны

ТХАФ ТХФЭ ТХФХ ТХХФЭ

95,0

4,75

1,5

0,5 0,5 0,5 0,5

Настоящий способ определения гардоны и его метаболитов позволяет сократить время, необходимое на осуществление анализа за счет уменьшения числа операций, а также повышает точность анализа для всех анализируемых одновременно веществ (гардоны, цгсЛ -изомера/ ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ).

Формула изобретения Способ количественного определения гардоны и его метаболитов путем обработки анализируемой пробы органическим растворителем, водой и гексаном, отделением и упариванием гексанового слоя и последующим хроматографированием остатка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, в качестве органического растворителя используют диметилформамид.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Бюллетень ВНЗР, 1974, №29, с. 66.

2.Вылегжанина Г.Ф., Кейсер Л.С. Определение гардоны 2,4,5-трихлорфенацилхлорида и 1-(2,4,5-трихлорфенил)-2-хлорэтанола методом газожидкостной хроматографии. Химия в сельском хозяйстве , 1974, №8, с.32,