Ингибитор бактериофага N=69-6 Советский патент 1979 года по МПК C12B1/24 

I

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам ограничения бактериофаговой инфекции, оно может быть использовано при производстве продукта защиты растений - знтеробактерина.

Известны средства, ннгибируиицие бактериофаговую инфекцию в ферментационных средах 11. Недостатком известных средств является снижение или исчезновение эффективности через некоторое время их использования. Это обусловлено изменчивостью и приспособляе- мостью бактериофагов.

Целью изобретения является изыскание новых средств, ингибнрующих бактериофаг g 7 Bacillus thyringiensis var. galleriae № 69-6, доступных для использования в промышленном масиггабе к обладающих лучшими биологическими свойствами.

Для достижения указанной цели в качестве ингибитора бактериофага g 7 Bacillus thuringiensis var. galleriae № 69-6 применяют N- (о-нитрофенилсульфенил-и- фенил-а-аланин (НФСФА) в виде дицикпогексиламмониевой соли. Это соеднненне применяется в качестве

реактива в химии пентидов 2. Его включают в состав питательной среды в начале ферментации. Оно селективно влияет на развитие данного бактериофага, не оказывая отрицательного влияния на рост и paз tнoжeниe культуры.

Пример 1. Ингибирование бактериофага g 7 на твердой питательной среде в чашках Петрк.

Питательную среду, состоящую из 15 г кукурузной муки, 30 г кормовых дрожжей, 10 г агар-агара и воды (до 1000 ил), хорошо перемешивают, доводят рН до 7,0-7,4 и стернлизуют 40 мин при 129С. Стерильную среду охлаждают до 50° С и разливают по чашкам Петри. После застывания нижнего слоя по его поверхности разливают смесь, ссктояшую из 0,2 мл :смытой с косячка односуточной суспензии Bacillus thuringiensis var. galleriae № 69-6, 0,2 мл бактериофага g 7 (lO клеток/мл) , 0,2 мл 0,2%-ного раствора диииклогексиламмониевой соли НФСФА в эта}юле (70°) и 3 мл расплавленного и охлажденного до 42 С 0,6%-ного агар-агара. После засты3ния верхнего слоя среды чашки инкубируют в термостате при 37° С. .Контролем служат чашка Петри, содержащие те же компоненты, кроме инпибитора НФСФА. Результаты опытов оценивают по количеству негативных колоний образутощихся через 24 ч. Проводят 12 опыто (Количество негативньгх клеток без ингибитора 181±21,0; с ингибитором 15±0,5. Эффективность 92%. Пример 2. Ингибирование бактериоф га g 7 в жидкой среде. Питательную среду, состоящую из 30 г ко мовых дрожжей, 15 г кукурузной муки и воды (до 1000 мл), хорощо перемешивают, рН доводят до 6,8-7,2, разливают в колбы по 80 мл и стерилизуют 45 мин при 129°С. После охлаждения до 40° С среду засевают по 0,2 мл смытой с косячка односуточной культуры № 69-6 (10 клеток/мл) и соответст4вугощим количеством бактериофага g 7 из расчета 1 фаговая частица на 1 бактериальную клетку. После этого вносят спиртовой раствор НФСФА в таком количестве, чтобы его конечная концентрация в колбах составляла 20 мг/л. Контрольные колбы готовят так же, но в них не вносят НФСФА. Опытные и контрольные колбы ставят на круглые качалки (180 об/мин) и инкубируют 48 ч при , Эффективность действия НФСФА на бактериофаг g 7 оценивают путем подсчета количества живых клеток в 1 мл питательной среды через 24 и 48 ч роста культуры. Подсчет осуществляется методом разведения, высевая на агаризованную среду (мясопептонный агар) выросшие колонии. Процесс образования спор и кристаллов контролируют с помощью микроскопа. Полученные результаты ингибирующего действия НФСФА и бактериофаг g 7 приведены в таблице.