Штамм @ @ @ @ 1148/69/7/,используемый в качестве тест-объекта для индикации бактериофагов Советский патент 1985 года по МПК C12N1/00 C12N7/00 

со

00 4 О СО 1 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касае ся индикаторного штамма Bacillus thuringiensis, используемого для об наружения умеренных бактериофагов, выделяемых-лизогенными культурами того же вида - продуцентами инсекти цидных препаратов. Аналогов в патентной и научноисследовательской литературе не обн ружено. Цель изобретения - штамм Bacillu thuringiensis, который может быть и пользован в качестве тест-объекта для индикации бактериофагов производственных штаммов вида Bacillus thuringiensis. Эта цель достигается с помощью штамма Bacillus thuringiensis var. galleriae 1148/69/7/. Штамм получен из культуры Bacillus thuringiensis var. galleriae 69/6 путем последовательной обработки вегетативной культуры нитрозогуанидином и бромистым зтидием и отбора аспорргенного клона, устойчи вого к антибиотикам, рифампицину и Стрептомицину. Штамм Bacillus thuringiensis var. galleriae 1148/69/7/ хранится Центральном музее промьшшенных микр организмов института ВНИИгенетика под номером ЦМПМ В-2605 и характери зуется следующими признаками. Культурально-морфологические при наки. На среде МПА образует плоские колонии светло-серого цвета, с ровн или слабо изрезанным краем, 3 - 5 м в диаметре, легко снимающиеся с ага ра. На среде ДПС (дрожжи 30 г, кукурузная мука 15 г, агар 20 г, вода 1 образует плоские колонии, серые, матовые, 3 - 5 мм в диаметре. На среде № ВТ, содержащей 8 г/л питательной среды, 3 г/л дрожжевого зкстракта, 20 г/л агара (все компоненты фирмы Дифко), с рН 7,3 коло нии плоские, полупрозрачные, 5 мм в диаметре, мягкой консистенции. На полусинтетических средах, содержащих, г/л: MgSO 0,2; CaCl2 0,0 агар 20; НлО 1 л и в качестве органического компонента пептон 20 г/л или триптон 20 г/л или казеин 20 г/ с рН 7,4 колонии плоские, матовые, округлые 1 - 5 мм в диаметре. 9 На жидких полусинтетических средах и на мясопептонном бульоне рост культуры равномерный по всему объему среды, сплошной без планки или хлопьев. Оптимальные параметры роста при рН 7,2 - 7,4 и t 28с. Форма-клеток палочковидная, клетки одиночные или в цепочках, окраска по Граму положительная, по Н-антигену культура относится к V сероварианту. Спор и кристаллов не образует. Физиолого-биоЛогические признаки.Молоко пептонизирует без коагуляции, на агаре с крахмалом зона гидролиза 8,5 мм, пигмент не образует - обладает лецитиназной активностью. Усваивает глюкозу, маннозу, мальтозу, целлобиозу. Активен по отношению к салицину и эскулину. Нитраты не восстанавливает. Штамм чувствителен к вирулентным бактериофагам Bacillus thuringiensis (26 бактериофагов) и к умеренным бактериофагам штаммов ;Bacillus thuringiensis 1,111, 1У и У серовариантов. Использование штамма для индикации бактериофагов,спонтанно вьщеляемых производственными культурами Ва.cillus thuringiensis, показано на примерах 1-3. Пример 1. Исследуемую и, индикаторную культуры пересеевают с чашки Петри в мясопептонный бульон и инкубируют на качалке 220 об/мин при в течение 4 - 6 ч. В чашки Петри разливают по 25 мл среды МПА (2% агара), содержащей 50 мкг/мл рифампицина, после застывания агара чашки подсушивают 3 - 4 ч В пробирки разливают по 3 мл среды МПА (0,7% агара), выдерживают на водяной бане при , вносят по 0,2 мл 4 - 6-ти часовых культур исследуемого и индикаторного штаммов, содержимое пробирок выливают в чашки Петри на поверхность среды МПА с антибиотиком. Опыт проводят с двумя контролями: в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45°С мягким агаром вносят 0,2 мл 4 г 6-часовой индикаторной культуры, содержимое выливают в чашку Петри на поверхность среды МПА с рифампицином; в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45С мягким агаром вносят 0,2 мл 4 6-часовой исследуемой культуры, содержимое выпивают в чашку Петри на поверхность среды МПА с рифампицином.

Опытную и контрольные чаши инкуби руют при 16 ч. В контрольной чашке с индикаторной культурой образуется бактериальный газон. В контрольной чашке с посевом исследуемого штамма среда остается прозрачной. На опытной чашке на фоне газона индикаторной культуры видны негативные колонии бактериофага.

Пример 2. Опыт проводят аналогично примеру 1 с заменой антибиотика рифампицина на стрептомицин (250 ед/мл).

Пример 3. Опыт проводят аналогично примеру 1, но без использования антибиотика. Культуру исследуемого штамма центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 мин и титруют супернатант. Учет результатов проводят аналогично примеру 1.

Использование штамма позволит вести контроль титра фаговых частиц в различных условиях вырашивания, определить стабильность лизогенного состояния штаммов.

Штамм Bacillus thuringiensis var.galleriae 1148/69/7/,ЦЙПМВ-2605 (Центральный музей промышленных мик-/ роорганизмов института ВНИИгенетика), используемый в качестве тестобъекта для индикации бактериофагов.