Способ получения мутантов холерных вибрионов Советский патент 1981 года по МПК C12K1/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии. Известен способ получения мутанто холерных вибрионов путем выращивания исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовления микробной суспензии, обработкой ее нитрозомети мочевиной, пересевом на плотную пита тельную среду и отбором колоний мутантов 1 . Однако известный способ является довольно сложным. Целью изобретения является упрЪщение отбора мутантов. Эта цель достигается тем, что сус пензию обрабатывают нитрозометилмоче виной в концентрации 0,1 - 0,5 мг/мл и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний. Способ осуществляется следующим образом. Засевают петлю суточной агаровой культуры холерного вибриона в 5 мл дрожжевого бульона. После двукратного отмывания 1-суточной бульонной культуры физиологическим раствором к осадку добавляют 1 мл его. В 0,1 мг/мл НММ вносят 0,1 мл отмытой культуры холерного вибриона. Раствор нитрозометилмочевины готовят путем добавления 1 мг НММ в 1 мл физио.лЬгическ6 гб раствора. 0,1 мл препарата переносят в 0,9 мл физиологического pacTBOpja, в который добавляют 0,1 мл культуры. После контакта с препаратом в течение 15 минут производят высев на питательную среду слейующего состава (г/л) : экстракт дрожжевой (аминный азот 30 мг %) - 10,0 пептон Мартека (соотношение 1:1 к объему дрожжевого экстракта) - 5,0 агар Корсаковский - 20,0 Посевы выращивают при 37 и наблюдают за образованием пигментных колоний 10 сут. Пигментную колонию пересевают на чашку с агаром. Через 1-2 сут выращивания газон выросшей культуры приобретает шоколадный цвет. Селекционированные этим способом мутанты стойко сохраняют способность образовывать пигмент. Способ иллюстрируется следующим примером. 1 мг нитрозометилмочевины растворяют в 1 мл физиологического раствора. О,1 мл препарата переносят в 0,9 мл физиологического раствора, в который . добавляют О,1 мл Vibrioeltor 381-В. Штамм готовят путем посева 1

петли суточной агаровой культуры в п1р1б6ирку с 5 мл бульона. Через сутки выраащвания при 37 центрифугируют

и Удаляют надосадочную жидкость. К осадку добавляют по 5 мл физраствора и 01ткывают центрифугированием дважды, удаляя недостаточную жидкость. Затем к осадку добавляют 1 .мл того же раств рра. Смесь НИМ с культурой холерных вибрионов помещают в термостат на 15 мин. при. 37 . Затем 0,1 пробы переносят в 10 мп бульона и пс 0,5 мл последовательно раститровывают в шести пробирках с 4,5 мл бульо на. Из каждой пробирки высевают по 0,1 мл на 3 чашки с агаром для получения изолированных колоний. Через

ёу Шгйрсхвйдят повторное титр овйние культуры из всех пробирок по 0,5 мп и высевают на 3 чашки с агаром по 0,1 мл из 5, б, 7 пробирок. Все посевы сохраняют при в течение 10 суток. Колонии коричневого цвета перёсевают на чашку с агаром и через 1 сут. выращивания газон культуры имеет шоколадный цвет. Остальные свойства пигментной культуры Vibrio-

eltor 381 П не отличаются от исходного штамма.

Использование изобретения позволит упростить отбор мутантов холерных вибрионов при проведении генетических исследований.

Формула изобретения

Способ получения мутантов холерных вибрионов путем выращивания исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовления микробной суспензии обработкой ее нитрозометилмочевиной, пересевом на плотную питательную среду и отбором колоний мутантов, о т л и ч а ю щ и и с я тех что, с целью упрощения отбора мутантов, суспензию обрабатывают нитрозометилмочевиной в концентрации 20 0/5 мг/мл и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Проблемы особо опасных инфек25 ций, 1972, в. 4(26), стр.- 95-99.