Способ отбора лизогенных штампов холерных вибрионов Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 

:л

ю Изобретение относится к области медицины, а именно к П- кpoбиo.пoгии. Известен способ отбора лиэогенны штаммов холерных вибрионов, включаю щий выращивание в питательном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых питательных сред в присутствии индикатора в верхнем слое среды l , Однако известный способ является довольно сложным. Целью изобретения является ускорение и упрощение отбора лизогенных штаммов холерных вибрионов. Цель достигается тем, что в способе отбора лизохенных штаммов,, включающем выра1дивание в питательном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых сред в присутствии индикатора в ьерхнем слое среды, полученную больонную культуру непосредственно высевают на агаровы среды, содержащие в качестве индика тора основной фуксин в концентрация 0,1, 0,2 и 0,3 мг/мл среды, и от бирают лизогенные mTaNiMbi по наличию роста на средах в присутствии всех Концентраций фуксина. Способ осуществляют следунзцим об разом. 10 мг основного фуксина растворя ют в 10 мл дистиллированной воды, подогревая над пламенем горелки до полного растворения. Затем возрастаю ;аив количества приготовленного раст вора фуксина О,5 мл (1), 1 мл (1), 1,5 мл (Ш), что соответствует ОД: 0,2f 0,3 мг/мл основного фукси на, вносят в 3 пробирКи растопленно 0,7%-ного мясопептоннбго агара рН 7,6-7,8) и выливают вторым слоем на, поверхность 1,5%-ного агара в 1, И, Ш соответствен но. Среда кмеет малиновую окраску. На поверх - ость застывшего наносят 1 каплю четырехчасовой бульонной куль туры лизогенкого и нелизогенного штамглов в виде дорожки. Результаты учитывают через 1 сутки выращивания при 37 С. Рост лизогенных культур, имеющих колонии розового цвета, отмечается на всехсредах, содержащих фуксин, с уменьшением интенсивности роста к Щ чашке, где наибольшая доза препарата. Рост нелизогенных штаммов отсутствует, иногда присутствуют единичные только на 1 концентрации. Через сутки выращивания посевов петлей снижают колонии с чашки, содержащей наибольшую концентрацию фуксина и пересевают на обычную питательную среду. Выросшие лизогемг ие колонии сохраняют все свойства исходных штаммов. П р и м е р. Отсевают в бульон по 1 петле односуточные.агаровые культуры вибрионов зльтор 381.-В (лизогенный) и 5879 (нслизогенный) и выращивают в течение 4 ч при 37 С. Готовят гшотную питательную среду, содержащую фуксин. Для этого 10 мг осног.ного фуксина растворяют В 10 мл дистиллированной вод1з1, подогревая над пламенем горелки до полного растворения. Затем отбирают из горячего раствора фуксина 0,1 мл (1) и 1 мл (П) f 1,5 мл (fi) вносят в три пробирки с 4 мл растопленного 0,7%-ного агара (1, П, Ш соответственно) и выливают вторым слоем на поверхность 1,5%-ного мясопептонного агара в чашки Петри I, И, Ш соответственно) . На xopcujo подсушенные чашки с агаром фуксина наносят 1 каплю четырехчасовых бульонных культур 381-В и 5879 в виде дорожек параллельно друг другу. Посевы выращивают при З7с и учитвают цвета отмечается на всех агаровых пластинках, рост нелизогеьп1ой культуры 5879 отсутствует. Лизогенную культуру снимают петлей с чашки Ш и пересевают на обычный агар для дальнейших опытов. Ке.пизогенную культуру пересевают в исходной чашки без фуксина. Изобретение позволяет ускорить и упростить отбор лизогенных мггаммов холерных рибрионов npi-: проведении генетических исследований.

СПОСОБ ОТБОРА ЛИЗОГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ, включающий выращивание в питательном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых питательных сред в присутствии индикатора в верхнем слое среды, отличаю щ И и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, полученную бульонную культуру непосредственно высевают на агаровые среды, содержащие в качестве индикатора основной фуксин в концентрациях 0,1 0,2 и 0,3 мг/мл среды, и отбирают лизогенные штамл« по наличию роста на средах в присутствии всех концентраций фуксина.