Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при оценке качества питательных сред,, используемых для виб- риоцинотипирования холерных вибрионов .
Цель изобретения - повышение точности способа.
Для осуществления способа используют в качестве тест-штаммов культу ры бактерий Vibrio cholerae eltor Р-10588, Р-9952 и Р-10117, которые депонированы под номерами КМ-13, КМ-14 и КМ-15 соответственно и. характеризуются следующими признаками. 1.
Культурально-морфологические и физиолого-биохимические признаки. Грамотрицательные полиморфные изогнутые палочки. Относятся к I группе
Хейберга.
Рас0 епляют глюкозу в среде Хью- 1 лейфсона с образованием кислоты без 1 газа в аэробных и анаэробных услови-.
ях. Образуют ацетилметилкарбинол.
Оксидазопозитивные, обладают лизин- и орнитин-декарбоксилазой. Не имеют -аргининдигидролазы. Образуют индол. Не образуют сероводород.
Штаммы КМ-13 и КМ-14 агглютинируются до титра сыворотками 0м и Инаба и не агглютинируются сывороткой Огава. Штамм К-15 агглютинируется до титра сыворотками О и Огава и не агглютинируется сывороткой Инаба. Все штаммы чувствительны к
HSKFi.l
SSSSHi
ascafcs
фагам Эльтор и не чувствительны к фагам
Штаммы КМ-14 и КМ-15 хорошо растут на агаре с полимнксином (50 ед/мл), штамм КМ-13 на этой среде образует единичные колонии и обладает широким спектром вибриоцино- генной активности, штамм КМ-14 - умеренным спектром, штамм КМ-15 - узким спектром.
Сшособ осуществляют следующим образом.
Суточные бульонные культуры каждого тест-штамма КМ-13, КМ-14 и КМ-15 засевают полосой на середины трех подсушенных пластинок 1,5%-ното питательного агара с цитратно-фосфат- ным буфером. Посевы инкубируют при в течение 48-72 ч„ По истечении срока инкубации посевы тест-штаммов подвергают холодовому шоку, затем обрабатывают хлороформом. К полосам выросших тест-штаммов подсевают бульонные культуры индикаторных штаммов энтеробактерий: 1 - Shigella flexne- ri 3189; 2 - Shigella flexneri 38/40; 3 - Shigella dysenteriae 43; 4 - Shigella sonnei M 2/2 (22); 5 - Shigella sonnei M-56 (31); 6 - Shigella sonnei 17(2); 7 - Escherichia coli C(l); 8 - Escherichia coli G(l); 9 - Escherichia coli K-12; 10 - Vibrio cholerae 541 (54); 11 -Vibrio cholerae 296/.1 (20); 12 -Vibrio cholerae 24 Shein 1077.
Посевы инкубируют в течение 18 ч. Чувствительность индикаторных культур к вибриоцинам регистрируют по отсутствию их роста на полосе или за пределами роста тест-штаммов. Спектр чувствительности устанавливают по табл. 1.
Испытуемый агар считают пригодным для вибриоцинотипирования при воспроизведении спектра ингибирующей активности тест-штаммов по отношению к индикаторным культурам в соответствии с табл. 1
Пример 1. Контроль 1,5%-но- го агара Мартена, рН 7,6, серия 15 на пригодность для вибриоцинотипирования. По результатам контроля тест- штаммом Р-1 (прототип) агар этой се- рии признан годным для диагностики холеры.
Первый день„ Суточные агаровые культуры тест-штаммов КМ-13 (Р-10588).
0
5
0
5
0
5
0
КМ-14 (Р-9952) иКМ-15 (Р-10117) засевают в бульон Мартена, рН 7,6.
Второй день. К расплавленному и остуженному до 45°С агару добавляют ингредиенты цитратно-фосфатного буфера кз расчета на 100 мл по 2,0 мл 25%-ного раствора двузамещенного фосфорно-кислого калия и лимонно-кислого натрия и 0,5 мл 0,6%-ного раствора хлористого аммония.
По одной капле суточных бульонных культур каждого из тест-штаммов наносят в край тщательно подсушенной пластинки взятого для исследования агара и дают стечь по середине пластинки в виде полосы. После подсыхания посевного материала чашки помещают в термостат при 37 С на 48 ч.
Четвертый день Чашки Петри с выросшими на них культурами тест-штаммов переносят в холодильник при +4 С.
Пятый день о Рост тест-штаммов на полосе посева счищают предметным стеклом, обрабатывают парами хлороформа 1 ч, а затем проветривают 1- 2ч, Суточные бульонные культуры индикаторов (по 4 культуры на каждую пластинку) подсевают перпендикулярно к полосе роста продуцента также в виде полос.
Шестой день Учет результатов приведен в табл. 20
Пример 2, Контроль агара ВНИИВС, серия 8. Работа в первый- шестой дни проводится аналогично примеру 1, Учет результатов приведен
в табл. 3.
I
Пример 3. Контроль агара дрожжевого, серия 3. Работа в пер- вый-юестой дни проводится аналогично примеру 1 о Результаты приведены в табл„ 4.
у Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность отбора сред, пригодных для вибриоцинотипирования холерных вибрионовk что невозможно при использовании известного способа.
рмула изобретения
Способ контроля питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов, включающий посев тест-штаммов на исследуемую питательную среду и инкубирование посевов, отличающийся тем,
что, с целью повышения точности способа, в качестве тест-штаммов ис- польэуют культуры бактерий Vibrio cholerae eltor, штаммы КМ-13, КМ-14 и КМ-15, среду параллельно засевают к.аждьм тест-штаммом, после инкубирования к тест-штаммам подсевают ин1251
6
дикаторные культуры энгеробактерий и холерных вибрионов, посевы инкубируют и определяют пригодность среды для вибриоцинотипирования по спектру ингибирующей активности всех тест- штаммов в отношении индикаторных культур.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR - источник умеренного фага х1 серотипа 1х гетероиммунной категории | 1988 |
|
SU1551735A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRас еLтоR-продуцент умеренного фага П серотипа у1 гетероиммунной категории | 1986 |
|
SU1388423A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR-источник умеренного фага ХШ серовара УП гетероиммунной категории | 1987 |
|
SU1454849A1 |
| СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 | 2004 |
|
RU2268942C1 |
| Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, несущих гомоиммунные умеренные фаги Ш гетероиммунной категории | 1988 |
|
SU1558987A1 |
| Набор штаммов бактерий для обучения вопросам микробиологии и методам лабораторной диагностики холеры | 2019 |
|
RU2743454C1 |
| Штамм VIвRIо сноLеRае еLтоR, используемый для получения спонтанного фага 123 | 1986 |
|
SU1373729A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR 80 - источник умеренного фага ХП серотипа Х гетероиммунной категории | 1989 |
|
SU1631078A1 |
| АВИРУЛЕНТНЫЙ ТЕСТ-ШТАММ БАКТЕРИЙ Vibrio cholerae БИОВАРА eltor СЕРОВАРА Ogawa (ctxA-, tcpA-, toxR-, zot-), ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ, ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ И УЧЕБНОМ ПРОЦЕССЕ | 2004 |
|
RU2254371C1 |
| СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ФАГА VIBRIO MIMICUS | 2008 |
|
RU2375437C1 |
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при оценке качества питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. Цель изобретения - повышение точности способа. Для проведения контроля питательных сред используют три тест-штамма VIBRIO CHOLERAL ELTOR NN КМ-13, КМ-14 и КМ-15. Тест-штаммы высевают на исследуемую среду, посев инкубируют и затем подсевают индикаторные культуры энтеробактерий. Посевы инкубируют и определяют спектр ингибирующей активности всех тест-штаммов в отношении индикаторных культур. По характеру спектра определяют пригодность исследуемой среды для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. 4 табл.
Vibrio cholerae eltor КМ-13 (Р-10588) Vibrio cholerae eltor КМ-14 (P-9952) Vibrio cholerae eltor KM-15 (P-10117)
Широкий
Умеренный
Узкий
+Ј+++++++++t
+ - + + +
+ - +
+ +
+ f
e
+ + + + + + + + +
+ + +
j1ш
+ +
+ f
Таблица 2
Годен
Таблица 3
| Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона | |||
| Саратов, 1983. |
