Штамм VIвRIо сноLеRае еLтоR, используемый для получения спонтанного фага 123 Советский патент 1988 года по МПК C12N7/00 C12N7/00 C12R1/63 C12R1/91 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для дифференциации эпидемических и неэпидеми ческих штаммов холерных вибрионов эльтор,

Цель изобретения - новый штамм Vibrio cholerae eltor 123 - продуцент умеренного фага 123, вирулентные мутанты которого пригодны для дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор.

Штамм депонирован в коллекции Института Микроб под номером КМ-16 (123).

Культурально- морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,5-3 мкм в длину и 0,2- 0,5 мкм в ширину, с одним полярно расположенным жгутиком, спор и кап- сул не образует, грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера, щелочной мясо-пептонный агар рИ 7,6+ ,2) образуют через 18 ч выращивания при 37+1°С круглые, диаметром 3,0+0,5 мм полупрозрачные колоннии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром.

На жидких средах (бульон Мартена, 1%-ная пептонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) образуют равномерную муть и нежную пленку на поверхности через 6 ч выращивания при 37-.-ГС.

Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен. Разлагает до кислоты без газаманнозу, сахарозу, глюкозу, маннит, не разлагаетарабинозу, инозит, лактозу, глюкозу на среде Хью- Лейфсона окисляет и ферментирует. Образует декарбоксилазы лизина и орни + 0,2 и выращивают при в тече ние 20+2 ч, затем фильтруют через фарфоровые бактериальные фильтры ма ки Ф-5. Полученный фильтрат наносят дорожкой на газон, приготовленный методом агаровых слоев, специальног индикаторного штамма V. eltor 692 (К.М. - 11). Для этого индикаторный

0 штамм выращивают 3 ч а бульоне Март на, 0,2 мл бульонной культуры вносят в 5,0 мл 0,7%-ного расплавленного (45 С) агара Мартена, перемешивают и выливают на 2%-ную агаровую пластину

15 в чашке Петри. После застывания верхнего слоя на его поверхность наносят пипеткой каплю фильтрата и дают стечь в виде дорожки. После инкубиро вания при (37+1°С в течение 20+2 ч

20 на месте нанесения фильтрата обнаруживают негативные колонии умеренного фага 123 и его вирулентные мутанты.

Платиновой иглой уколом в центр

25 прозрачной негативной колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона Мартена рН 7,6+0,2, туда же вносят 0,2 мл бульонной (трехчасового роста) культуры штамма-ментора

30 V.eltor 692 и 0,5 мл 0,7%-ного агара Мартена. Содержимое каждой, пробирки перемешивают и выливают на отдельную пластинку агара Мартена в чашке Петри и дают застыть. После выращивания посевов в течение 20+2 ч в

35 каждую чашку заливают по 1 мл бульо на Мартена и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано вьш1е.

40

Полученный фильтрат вирулентного мутанта размножают в жидкой среде (бульон Мартена рН 7,6+0,2). К 100,0 мл бульона добавляют 5,0 мл

Нина. Ферментирует крахмал и желатин.45 фильтрата и 1,0 мл бульонной (трех- Не растет при повьш1енной концент- часовой) культуры штамма 692, инкубируют при в течение 2,,5 до просветления, обеззараживают фитина, не образует дигидролазу аргирации хлористого натрия (7-10%).

Гемолизирует эритроциты барана по Грейгу.

Серологические свойства. Агглютинируется до титра холерными сыворотками О и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками RO и Инаба.

льтрацией через бактериологические 50 свечи фильтры, как указано вьш1е, после контроля на стерильность используют по назначению.

Вирулентные мутанты фага 123 ,2 и выращивают при в течение 20+2 ч, затем фильтруют через фарфоровые бактериальные фильтры мар- ки Ф-5. Полученный фильтрат наносят дорожкой на газон, приготовленный методом агаровых слоев, специального индикаторного штамма V. eltor 692 (К.М. - 11). Для этого индикаторный

штамм выращивают 3 ч а бульоне Мартена, 0,2 мл бульонной культуры вносят в 5,0 мл 0,7%-ного расплавленного (45 С) агара Мартена, перемешивают и выливают на 2%-ную агаровую пластину

в чашке Петри. После застывания верхнего слоя на его поверхность наносят пипеткой каплю фильтрата и дают стечь в виде дорожки. После инкубирования при (37+1°С в течение 20+2 ч

на месте нанесения фильтрата обнаруживают негативные колонии умеренного фага 123 и его вирулентные мутанты.

Платиновой иглой уколом в центр

прозрачной негативной колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона Мартена рН 7,6+0,2, туда же вносят 0,2 мл бульонной (трехчасового роста) культуры штамма-ментора

V.eltor 692 и 0,5 мл 0,7%-ного агара Мартена. Содержимое каждой, пробирки перемешивают и выливают на отдельную пластинку агара Мартена в чашке Петри и дают застыть. После выращивания посевов в течение 20+2 ч в

каждую чашку заливают по 1 мл бульо на Мартена и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано вьш1е.

льтрацией через бактериологические свечи фильтры, как указано вьш1е, после контроля на стерильность используют по назначению.

Вирулентные мутанты фага 123 об

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для дифференциации эпидемического и неэпидемического штаммов холерных вибрионов эльтор. Цель изобретения - новый штамм Vibrio cholerae eltor 123 - продуцент умеренного фага 123, вирулентные мутанты которого пригодны для дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эль- тор. Штамм депонирован в коллекции института Микроб под номером КМ-16 (123). Вирулентные мутанты фага 123 обладают высокой специфичностью, лизируют только неэпидемические штаммы холерных вибрионов эльтор.

Пример . Для обнаружения спон-55 ладают высокой специфичностью, они

танной продукции умеренного фага 123 и его вирулентных мутантов штамм 123 засевают в бульон Мартена рН 7,6+

лизируют только неэпидемические шта мы и не лизируют эшодемические штам мы холерных вибрионов эльтор. Их пр

лизируют только неэпидемические штаммы и не лизируют эшодемические штаммы холерных вибрионов эльтор. Их при313737294

менение на практике облегчает задачуФормула изобретения

эпидемических расследований при пла-Штамм Vibrio cholerae eltor КМ-16

новых обследованиях водоемов, терри-(123), используемый для получения

торий угрожаемых по холере.спонтанного .фага 123.