Способ выделения и очистки декстраназы Советский патент 1980 года по МПК C07G7/28 C12D13/10 

Предлагаемый способ относится к ферментной области лдакробиологической промышленности, он может быть использован в производстве и очистк ферментов, полученных из микроорганизмов. По этому способу осущестйля ся выделение и очистка фермента дек раназы при глубинном культивировании микробных продуцентов, в частности, грибов рода Peniciliium или Fusarium с использованием приемов солевого осаждения фермента и адсорбции его на алюмосиликатных глинистых минералах. Минеральные сорбенты широко используют для очистки ферментов. ;Известен способ 1, согласно кото:рому декстраназу сорбируют из исходного раствора культуральной жидкости на глине при рН 4,0-5,0 и десорбируют при рН 7-9. Затем добав ляют анионит ДЭАЭ-целлкшозы к попученному раствору фермента,при этом фермент связывается с анионитом, после чего проводят элюирование фермента с ионита. В качестве глин-сорбентов, декстр назы применяют каол«н/ получая наилучшие результаты, атакже фулерову землю, флоридин, бентонит и другие. Основньлии недостатками известного способа очистки фермента являются многостадийность-и трудность реализации способа в условиях крупномасштабного производства вследствие использования дорогостоящих анионитов на полисахаридной основе, а также наличия стадии обессоливания раствора фермента после элюирования с ДЭАЭ-целлюлоэы, Кроме того, по известному способу не проводится предварительная обработка глины с целью повышения ее адсорбционной способности, нет сведений о степени очистки ферментного препарата от углеводных примесей. Цель изобретения повышение степени чистоты фермента, а также упрощение .технологического процесса его получения. Цель достигается тем, что перед сорбцией фермент осаждают из культуральной жидкости сульфатом аммония, полученный осадок растворяют в воде или буфере, а сорбцию ведут при предварительно активированном минеральном сорбенте.

Дт1Я активирования сорбента бьти и спытаны разные спосюбы: 1) обработка 3 объемами концентрированной соляной кислоты в течение 2-3 ч при комнатной температуре с последующей промывкой глины водой и центрифугированием для отделения глины от

жидкости; 2) прогрев сухого порошка аскангеля в сушильном шкафу при в течение 4-5 ч.

Сравнительные данные о влиянии способа обработки глины на результаты сорбции и десорбции приведены в табл.1.

Таблица 1

24600

49

Элюат (после десорбции)

25400

51

Примечание. Концентрация аскангеля 1%.

Из. табл.1 видно, что без активирования глины выход фермента после десорбции составляет только 51%, при активировании - повышается до 80% 30 и более.,

Ферментные препараты, подвергавшиеся предварительной очистке путем осаждения сульфатом аммония, содержат достаточно высокие концентрации этой 35 соли, отделение которых в лабораторных условиях может быть осуществлено диализом или гель-фильтрацией. В про- изводстве эти приемы приводят к значи«

Исходная бесклеточная культурсшьнад жидкость

Раствор, полученный по предлагаемому способу, посСпособ может найти применение при npOMtjiJineHHOM производстве высокоочищенных ферментов декстраназы медицинского назначения.

8000

18

26

3200

82

35500

90000

74

тельному удорожанию получаемого продукта. Однако оказалось, что присутствие сульфата аммония в растворе

декстраназы не мешает сорбции этого фермента на глине, что позволило исключить промежуточную стадию обессоливания раствора фермента после его фракционирования сульфатом аммония.

В табл.2 приведена характеристика эффективности предлагаемого способа очистки декстраназы от примесей.

Т а б л и ц а 2

100

65

940

9900

Пример. Посевной материал гриба Penicillium funiculosum шт.15 выращивают 3 сут, на питательной среде (0,8% декстрана, 0,08% , 0,1%