Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов Советский патент 1980 года по МПК C07H21/02 A61K31/713 

Изобретение относится к способу тер моактивации двунитевых полирибонуклео- тидных комплексов, обладакадих интер(1 роногенными и противовирусными свойствами. Известен способ термоактивации двунитевых полирибенуклеотидных комплексов (комплексы полнинозиновой и полидитидиловой кислот, полиуридиловой и полиадениловой кислот), заключакицийся в прогреве растворов комплексов в культуральной сре де, состоящей из набора 0 аминокислот с добавкой ионов двухвалентного металла (например, или Мр) при 32 в течение 1 мин - 5 ч fl ., Недостатками известного способа термоактивадии двунитевых полирибонуклеотид ных комплексов являются плохая воспроиз водимость термоактивадии, получение препарата, содержащего токсичные высокоактивные полирибонуклеотидные комплексы, введение в водный раствор комплексов ионов двухвалентного металла, что приводит к нежелательным побочным эффектам . , ., „ - Ьля живых организмов,«Ш5ёяяр при внутривенном применении, использование культуральной среды, состоящий из набора 20 незаменимых аминокислот. Целью изобретения является разработка способа термоактивапии полирибонуклеотидного комплекса, расширяющего арсенал воздействия на живой организм. Поставленная цель достигается использованием в качестве двунитевого полирибонуклеотидного комплекса нетоксичного пол1фибонуклёотидного комплекса полирибогуаниловой (поли-Г) и полирибодитидиловой (поли-Ц) кислот с молярным соотношением полимеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом 300.000-60О.ООО далвгон и проведением щзодесса путем прогревания при ЭО-ЮО С в присутствии 0,05-0,3 М раствора хлористого натрия в фосфатном (ауфере в течение 2-30 мин, что позволяет получить препарат, не содержащий токсичных комплексов и вредных для живого организма ионов Са- или Mg, среда же (хлористый натрий в фосфавном буфере) 51вляется физиологической по ионному составу и применение ее не от побочных явлений в живом организме, прогревание при ЭО-ЮО С исключает стадию стерилизации, необходимую при биологиЦеских экспериментах на животных и в культуре ткани.

Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов заключается в прогревании раствора двунитевого подирибонуклеотидного комплекса и йоли-Ц с молярным соотношением попи™ меров в комплексе 1:1 .и молекулярным веЬом ЗОО.ООО-600.000 далы-он при 9ф-1ОО С в присутствии 0, М р твора хлористого натрия в фосфатн:ом буфере в течение мин, предпочтит ьно 5-15 мин,

1 П IT и м е р 1. Растворы, поли-Г и пс1ли-Ц в калийфосфатном буфере (КФБ) с 1рН 7,4, содержащем 0,15 М хлористый натрий, сливают и оставляют до полу тени|я комплекса поли-Г- поли-Ц на 16 ч при комнатной температуре. Концентрация пдлученного комплекса 1,63 мг/мл. 1 мл раствора комплекса поли-Ц соотношением полимеров в комплексе 1:1 Е

молекулярным весом ЗОО..ООО Дальтон помвща отв ампулу, запаивают ее и выдерживают при в течение 10 мни охлаждают до комнатной температуры, разбавляют до концентрации 0,5 мг/мл в OJOO5 М натрий-фосфатном буфере (НФВ) рН 7,4, содержащем 0,1М хлористый натрий, и исследуют профиль гель-хроматографии комплекса на сефарозе 2В в стандартных условиях. Исследуют противовирусную активность термоактивированного комплекса при интраназальном введении белым мышам. Полученные результаты сопоставляются с профилем гель-хроматографии и противовирусной активностью исходного комплекса до термоактнвации (контроль). Кумулятивная выживаемость мышей 87%, Б контроле 60%.

Пример 2-23. Резулы-аты термоактивации комплекса поли-Г поли-Ц при концентрации комплекса 1,63 и 0,5 мг/мл, концентрации хлористого натрия 0,05 О,ЗО М, температуре ЭО-ЮО С, времени прогрева 2-60 мин после предварительного хранения или комплекса при -14 С в течение различного времени прИ ведены в таблице.

00 ю О со со

О) 03 о О) Г

Ю о о о

н см со

OJ

н о

m е ж Кроме НФБ и КФБ используют нйтрий- осфптный буфер (КНФБ). Формула изобретения 1. Способ термоактивпции двунитевых полирибонуклеотидных комплексов, отличающийся тем, что комплекс полирибогуаниловой и полирибодитидиловой кислот с молярным соотношением полимемеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом ЗОО.ООО-60О,ООО дальтон прозтэе вают при ЭО-ЮО С в присутствии О,О5и,3 М раствора хлористого натрия в фосфатнокл буфере в течение 2-30 мни. 2, Способ по п. 1, о т л и ч « ю щи и с я тем, что комплекс прогрева ют в течение 5-15 мин. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1 .Е.тзе ceercq,,R.T).weees,R-c.Gra«H/ T.C.W.er4gcni.TtiertTia& activation of tlie ant-iviVat activity o s-sri-kAietic doutee-eirqnded potvt-ibonucteotides л WoE. Bioe.,56,83-100(iq71).