Способ стабилизации глюкоамилазы Советский патент 1981 года по МПК C12N9/96 

(54) СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

Изобретение относится к микробио логической промлшленности, а т,акже к крахмало-паточной, спиртовой, хлебопекарной , где ферментные препараты , глюкоамилазы широко применяются. Известен способ стабилизации dамилазы различными солями кальция, которые вводятся в препараты dl-амилазы во время или после очистки фермента t. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ стабили зации амилолитического фермента, зак лючающийся во введении в культуральную жидкость комплексного стабилизатора с последующей ее очисткой, где в качестве комплексного стабилизатора используют водорастворимую кальци евую соль и органический агент - али фатический гликоль, имеющий следующую формулу: HOfCHj CH Ol H или пропандиол, а в некоторых случаях неионогенное моющее средство Г2} . Недостатком известного способа стабилизации водных растворов фер((«ента является невысокая остаточная активность фермента при длительном хранении (так через четыре недели в пробе t остаточная активность составляет 51%) , а также высокое процентное содержание органического стабилизатора ClO%) в ферментном растворе. Цель изобретения - удлинение сроков сохранения глюкоамилазной активности при комнатной температуре и стерильности ферментного препарата. Поставленная цель достигается тем, что в соответствии со способом стабилизации глюкоамилазы, заключающимся во введении в культуральную жидкость комплексного стабилизатора с последующей ее очисткой, в культуральную жидкость в качестве комплексного стабилизатора вводят формалин в количестве 0,1-0,3% совместно с в количестве 1,4-1,6%. пример . Проводят стабилизацию глюкоамилазиой активности культурапьной жидкости. Культуральную жидкость получают глубинным культивированием дрожжеподобного микроор-ганизма. Endbmyco psis sp.20-9 на среде следующего состава, %: Кукурузный экстракт 3 Кукурузный крахмал 1 Олеиновая кислота 0,2 Культуральную жидкость отделяют от биомассы на сепараторе АСГ-ЗМ. Полученный ферментный раствор отбира ют в колбы с притертой пробкой ( V 50 ь№ ) и туда же добавляют (стабилизаторы различной концентрации В качестве стабилизаторов используют формалин, низин, а также комплексный стабилизатор - формалин + низин. Опыты проводят при комнатной температуре. Через определенные промежутки времени (О, 5, 14, 24, 32, 68 сут) в пробах определяют глюкоамилазную активность глюкооксидазным методом, содержание белковых веществ методом Лоури, а также наличие бактериального заражения. Полученные данные приведены в табл. 1. Наибольшим стабилизирующим эффек том обладает комплексный стабилизатор, состоящий из формалина (0,2%) и низина (1,5%), обнаруживающий синергическое действие. На 32-ые сутки хранения потери глюкоамилазной активности составляет всего 8% по сравнению с контролем. В контроле з &тр же время хранения глюкоамилазна активность снижается на 56% (с 13,3 ед/мл до 5,8 ед/мл). Изменение концентрациикомплексного стабилиза тора от 0,2% до 1,5% на сутки хранения сопровождается сохранением ферментативной активности в образцах (7, 8, 9) на уровне 9,4-12,3 ед/ 1Дальнейшее увеличение дозировки ста билизатора до 2,0% (проба 10) приво дит к уменьшению глюкоамилазной активности, которая составляет 9 ,,0 ед/ При обработке культуральной жидкости формалином увеличение его дозировки от 0,2% до 1,5% сопровождается на 32-ые сутки хранения уменьшением глюкос1милазной активности в образцах (1, 2, 3) с 9,37 ед/мл до 6,25 ед/мл, в то время как содержание белка находится на уровне 4,95,95 мг/мл. Следовательно, оптимальное количество формалина в растворе - 0,2%, при этом активность фермента уменьшается по сравнению с контролем (13,3 ед/мл) на 30%. Наименьший стабилизирующий эффект проявляется при добавлении в культуральную жидкость одного низина, в этом случае падение активности на 32-ые сутки хранения составляет 48-60%. Удельная активность при обработке комплексным стабилизатором меньше по сравнению с активностью при обра-ботке формалином в связи с более высоким содержанием белка, что можно объяснить белковой природой низина, представляющего собой полипептид. На 32-ые сутки хранения в образцах с формалином (1, 2, 3) и комплексным стабилизатором (7, 8, 9,10) бактериальное заражение не обнаруживается, тогда как в контроле и в образцах с одним низином (4, 5, 6) бактериальное заражение отмечается уже на 5-ые сутки хранения. На 52-ые сутки стабилизации культуральной жидкости все образцы подвергают бактериальному заражению за исключением пробы № 3, содержащей 1,5% формалина, однако в этой пробе на 32-ые сутки хранения сохраняется только 47% глюкоамилазной активности. В табл. 2 приведены данные, характеризукяцие остаточную глюкоамилазную активность, выраженную в процентах к исходной пробе. Образцы, приведенные в этой таблице, содержат оптимальное количество стабилизатора. Результаты свидетельствуют, что при добавлении в культуральную жидкость Endomycopsis sp. 20-9 комплексного стабилизатора, состошдего из формалина в количестве 0,2%и низина в количестве 1,5%, удается в течение 32 сут сохранить на 92% глюкоамилазную активность и предотвратить бактериальное заражение. Реализация изобретения позволяет удлинить сроки сохранения глюкоамилазной активности при комнатной температуре и стерильности ферментного препарата.

(О

я

S

R ю

(О

н

N (N

м

г

м п

N

ffl

г-(

(N 00

О in

л

to f

Г1

tn te

rел

о

со

ш

00

ел

1Л

in

1О

N

CJ

гЧ СП

ло

fN

г

оо Г1

о

т

I-I

yt

00

u

гп

СП

оо о

г-i

(П

kO

ku

чэ

СГ1

У|

о

in Ц

со

ГМ

Г-СП

тН

гЧ

00

со

Ч

О

к

о

t-t

н

о

(N гН П

о

гН

tH

r

гН

т-1

Ч

ГМ 00

о

гЧ

1Л

U7

00

ш

1Л

о

ЧГ)

г

о

гН

(

т

гю

t-j

о см

Ш

04 О

м о

«

Формула изобретения

Способ стабилизации глюкоамилазы, заключающийся во введении в культуральную жидкость комплексного стабилизатора с последующей ее очисткой, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков сохранения глюкоамилазной активности при комнатной температуре и стерильности ферментного препарата, в культуральТаблица

ную жидкость в качестве комплексного стабилизатора вводят формалин в количестве 0,1-0,3% совместно с низином в количестве 1,4-1,6%.

Источники ИНфОрМсЩИИ,

принятые во внимание при экспертизе

кл, С 12 D опублик. 1976 (прототип)