Штамм всти-301-продуцент нуклеотидов Советский патент 1980 года по МПК C12D13/06 

1,6 MM, края ровные, поверхность гла кая, рельф вьтуклый, аморфные, мягко маслянистой консистенции, цвет желты Сусло-агар. После 4-х суток роста образует точечные колонии желтого цв Картофель. Рост скудный. Цвет жел Мясо-пептонный бульон. Пятисуточн культура образует слабую равномерную муть. Пленку на поверхности не образ Осадок желтый, лйгко взмучивающийся образует равномерттую муть. , Физиолого-биохимические признаки Грамположительный микроаэрофил. Растет при температуре ЗО-ЗТС, оп мум зо°с. Усваивает глюкозу, мальтозу, иноз сахарозу. Слабо усваивает дульцит, кс лозу, арабинозу. Не усваивает маннит сорбит, рамнозу, лактойу. ГЛюйОзу, сахароз -, мальтозу сбраж вает до кислоты. Ацетилметилкарбинол не образует. Крахмал не гидролизует. Желатийу не разжижает. Индол не образуется. Сероводород образуется. Нитраты редуцирует, до нитритов. Молоко не изменяет. ЦелЛюлозу не гидролизует. Каталазная активность положительная. Уреаза - положительная. Примерь- использования штамма Cor kactei ium ofiec-r 6 ВСТИ-ЗО1. Пример. Посевная среда, ве Пептон1,5 Глюкоза2 MgSO Гв504 7Нз О Биотин ЗО мкг/л Среду разливают по 20 мл в Эрле мейеровские колбы емкостью 25О мл стерилизуют при давлении 1 ати 15 м Мочевину стерилизуют Отдельно при д лении 0,5 ати 15 мин, и добавляют в -колбы (0,2%) после стерили.зации. Ферментационная среда (вес.%): Глюкоза Мд &047H,0 2Н О К МРО 1. . .-.V .. .. КН; Р04 Пептон 30 мкг/л Биотин 61.4 Среду разливают по 15 мл в Эрлеимейеровские колбы емкостью S50 мл, добавляют BH.NqOH до рН 7,6 и стерилизуют при давлении 1 ати 15 мин. Мочевину стерилизуют отдельно при давлеtfflH 0,5 ати 15 -мин и добавляют в колбы (0,6%) после стерилизации. Витамины - Са - пантотенат и тиамин-НВг стерилизуют, пропуская через стеклянный фильтр № 4, и добавляют также в колбы после стерилизации из расчета соответственно 5 мг/л и 3 мг/Ло Ферментация. Культуру Cof4f.ne&actet iun rieciei ВСТИ-ЗО1 с двухсуточного косяка (рыбный гидролизат РПА; 30 С петлей переносят в колбы с посевной средой, которые ткзмещают на круговую качалку. Спустя 24 час культивирования на посевной среде при 30 С этой средой (10%) инокулфуют колбы с ферментационной средой. Ферментацию на круговой качалке проводят в течение 3-х суток и вносят в колбы по 30 мг аденина и 0,15 ел ксилола. Затем ферментацию продолжают еще сутки. Определяют нуклеотиды в культураль- ной жидкости. Клетки удаляют центрифугированием, флоккулирующие белки - нагрева1шем в 1шпящей водяной бане в течение 5 мин после подкисления до рН 4. Затем нуклеотиды экстрагируют 0,6 н. НС104 . Обработанную таким способом культуральную жидкость подвергают хроматографическому анализу. Нисходящая бумажная, хроматография в Системе изомасляная кислота: ледяная .уксусная кислота : 1 н. NH ОН г 10 : 1: 5. Пятна нукле- отидов на бумаге просматривают в УФ на ультрахем:ископе, злюируют 3 мл воды в Кип5пцей водяной бане в тече1ше 30 мин . Количественное определение нуклео йДоЬ производят по Е , измеренном на спектрофотометре, с помощью переводных коэффициентов. Ионообменную хроматографию проводят на смоле АВ-1Т (С1-) в системе НС1: в линейном градиенте. Выход АТФ , АДФ, АМФ составляет соотнетственно 1,5 , 0,55 и 1,5 мг/мл. . При добавлении гуанина - 0,92 мг/мл ГТФ ,0,42 мг/мл ГДФ и 0,7 мг/мл ГМФ. При добавлении оснований искусственного происхождения, таких как 6-мер-каптопурин, 8-азаде1шн, 4-тиоурацил, сумма нукле6тйдЬв в виде нуклеозидмо1ю,фосфата составляет 1-2 мг/мл. 572 Мстюльсюппию пуюдлагасмого штамма позволит упростить технологто поЛучотшя различных нуклеотидов в производственных условиях для получогшя Препаратов, используемых в медицине. Формула изобретения Штамм Cor4 ne6actei iu ri i fiecie ВСТИ-ЗО1- продуцент - аденозинтрифосфат АДФ - аденозиндифосфат - аденозинмонофосфат ГТФ - гуанинтрифосфат нуклеотидов. Хранится в Музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером ЦМПМВ-1597. Культурально- морфологические приз- наки. Яйцевидные палочки (0,6-0,9)х( 1,53) мкм, иногда встречаются более крупные палочки. Заметного плеоморфиама нет. Расположены парами под углом друг к другу в пакетной упаковке, иногда по одной. Споры и капсулы отсутствуют. Не подвижные. Мясо-пептонный агар. После 2-х суток роста при ЗО С образует круглые колонии диаметрюм 3-4 мм, края ровные, по верхность гладкая, рельеф вьтуклый, аморфные, светонепроьшцаемые, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый. Рост по штриху умеренный, снизу затягивающийся, сверху ограниченный, рельефный, блестящи и,,поверхность гладкая, маслянистой консистенции, цвет жел тый. Глюкозо-картофельный агар. После 3-х суток роста при ЗО С образует круг Г;1в1 лые колошги диаметром 2-3 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой- маслянистой консистенции, цвет желтый. Среда Чапека с ЗО мкг/л биотина. После 3-х суток роста при ЗО С образует круглые колонии диаметром 1,01,5 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф вьтуклый, аморфные, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый. Сусло-агар. После 4-х суток роста бразует точечньге колонии желтого цвета. Картофель. Рост скудный. Цвет желтый. Мясо-пептонный бульон. Пятисуточная культура образует слабую равномерную . Пленку на поверхности не образует. ОсадокГ желтый, легко взмучивающийся, образует равномерную муть. Физиолого-биохимические признаки. Грамположительный, микроаэрофил. Растет при температуре 20-37 С, оптимум - ЗО М. Усваивает глюкозу, мальтозу, инозит, сахарозу. Слабо усваивает дульцит, ксилозу, арабинозу. Не усваивает маннит, сорбит, рамнозу, лактозу. Глюкозу, сахарозу, мальтозу сбраживает до кислоты. Ацетилметилкарбинол не образует. Крахмал не .гидролизует. Желатину не разжижает. Индол не образуется. Сероводород не образуется. Нитраты редуцирует до нитритов. Молоко- не изменяет. Целлюлозу не гидролизует. Каталазная активность положительная. Урёаза - пож)жительная.