Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиопогичеркой промьпиленности, в частности к производству ферментных препаратов.

Известен штамм BaCAttos Sobt-iC-is 103 - продуцент амипосубгилина и протосубтилина 1 .

Известный штамм не обладает устойчивостью к вирулентным фагам.

Целью изофетения является получение штамма БрЫЕ&ив SUtotiEis. 163, обладающего устойчивостью к вирулентным фагам.

Штамм B.acittu, subtitis 1бЗ получен в результате изучения естественнйй иаменчивостивспользуемых в производсч;ве амилосубтилина и протосубтилина культур Bacittus suttitis

Штамм subtiE is 163 хранится в музее культур микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМ В-1560 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8x2-3 мкм, клетки подвижны, жгутики расположены по периферии клеток. Клетки не содержат живых включений. На 4-5-в сутки на сусло-агаре .офазуются овальные споры размером 0,6-0,9х 1,0-1,5 мкм. Споры расположены эксцентрально, преимущественно ближе к центру. Мясо-пептонный агар. На 3-й сутки роста ко10лонии белого цвета, круглые с неровными краями, центр морщинистый, возвьпнающийся в виде в:§лкарчика.

Сусло-агар. На 3-й сутюи роста ко15лонии белого цвета, круглые, края неровные, ценф гладкий, но встречается и морщинистый.

Ломтики картофеля. На 3-й сутки рост

20 обильный, складчатый.

Гл1скозный агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу.

Физиолого-йюхимические свойства. Температурный оптимум +37°С, Жела шну при медпенно разжижает ;иног да до 15 суток и более, Молоко с лакмусом через 10 суток слабо пептонизирует через 15 суток ство разкивает. Лакмус обесцвечивает, .Крахмал гнйрол11зуёт. Усваивает глюкозу, сахарозу. Не сбраживает лактозу, галактозу, мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу. На среде Кларка образует ацетилмёти дарбинол, интенсивность кисл.отоофазования. слабая, Культура Baci&eus 5u1ot- e,-(s 163 обладает устойчивостью к вирулентным фагам. . Пример использования штамма Bacietus «oubt-ieis 163, Культуру штаммахранят в лиофильновысушенном состоянии в запаянных ам. пулах при температзфе . Защитной средой для лиофилизащш служит Сбгёоротка бычьей крови, добавляемая по 0,2 мл в каждую ампулу. С ожив ления культуры в ампулу заливают 1 мл мясопептонного бульона, суспензию пер мешиваюз иглой, закрываютампулу стерильйой ватной пробсой и выдерживают в таком виде в термостате при ЗО С в течение 10-15 .мин, после чего термостатируют при 37 С в течение 15 мин. Суспензию культуры пересевают на скошенный в пробирках суслоагар 3,5-5,О Б юш на стерильные ломтшш картофеля и тфмостатируют при 37°С в течение тре суток, Для приготовления посевного материа ла культуру, выращенную на сусло-агаре ЕЛИ ломтиках картофеля, переносят в кол бы с посевной средой следующего состава, %: Крахмал20 Аммоний лимоннокислый3Калий фосфорнокислый однозамещен, ный0,2 Натрий фосфорнокислый двузамещенный0,3 Магний сернокислый. 0,15 Железо сернокислое закисное0,002 Медь сернокислая0,00075 Марганеп сернокислый0,000125 Аминобензойная кислота рН 7,0 О,О01

737442 Культуру выращивают поверхностным етодом в /термостате при в теение трех суток. Полученную посевую культуру используют для засева ферентационной среды. Состав ферментационной среды и усовия ферментации при биосинтезе амидоубтилина, вес,%: Крахмал:, 16-18 Кукурузный экстракт1,2 Дрожжи сухие кормовые 0,24 Лактоза0 3 Магний сернокислый0,015 Калий сернокислый0,3 Аммоний форсфорнокислый двузамещенный0,84. Натрий хлористый0,03 Медь сернокислая0,00039 Окись кальция 0,0012 Амилосуб-шлин 0,017 Ортофосфорная кислота 0,61 Вода рН 6,5-6,7Остальное Культивирование осуществляет при температуре , при постоянном перемешивйнии и аэрации среды и при поддержании остоянного рн 6,2-6,3 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака. Длительность ферментации 66-72ч. фермен -айгвная актавность культуральной жидкости по методу согласно ГОСТ 20264,4-74 не ниже. 160 ед АС/мл. Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе протосубилина, вес.%: Крахмал8,0 Кукурузный экстракт0,8 Дрожжи сухие кс мовые0,4 Магний сернокислый0,05 Кальций хлористый0,01 Калий хлористый0,15 Аммоний фосфор нокисль1й двузамещенный1,2 Амилосубталин0,05 Ортофосфорная кислота0,2 В°« Остальное рН 6,6-6,8 Культивирование осуществляется при температуре и при постоянном перемешивании и аэрации среды. Длительность ферментации 50-56 ч. ферментативная активность культуральиой жидкости по методу Лейлявнфольгарда согласно ТУ 59-32-70 не ниже 170 ед. ПС/мл, После окончания ферментации культуральную жидкость подвергают l,5-2-Kpai ному концентрированию в ,вак у у м-выпарной установке при температуре 35-40С Упаренную культуральнувэ жидкость высушивают в распылительной сушильной установке при следующих условийх: температура сушильного агента на входе в сушильную башню 140 выходе 70-75С. Полученный сухой концентрат усредняют поваренной солью до активности, требуемой действующими ГОСТ на препараты амнлосубтилин и протосубтилин. Использование штамма ,e,us воЪ t-iEts163 позволит повьгсить съем готового продукта с единицы объема питательной среды и снизить затраты связанные с дополнительной обработкой и стерилизацией оборудования. Формулаизобретения Штамм BacnEEus биЬЪл /, 163 - п дуцент амилосубтилина и протосубтилина 5 анится в музее культур микроорганиэмов ВНИ Генетики под номером ЦМПМ В-1560. Культурально-морфологические признаки,Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8х 2-3 мкм, йлетки подвижны, жгутики расположены по периферии клеток. Кле-пш не содержат жировых нслючений. На 4-5-е супси на сусло агаре офазуются овальные спо737442ры размером 0,6-0,9 х 1,О-1,5 мк Споры расположены эксцентрально, преимущественно ближе к центру, Мясо-пептонный агар. На сутки роста колонии белого цвета, круглые с неровными краями, центр моряпиннстый возвышающийся в виде вулканчшса. Сусло-агар. На 3-й сутки роста колонии белого цвeтa круглые, края неровные, центр гладкий, но встречается и морщинистый. Ломтики картофеля. На 3-й сутки рост обильный, складчатый, Глюкозйый агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу. Физиолого-биохимические свойства. Температурный оптимум .+37°С. Х елатину при 18°С медленно раз- жижает, иногда до 15 суток и более. Молоко с лакмусом через 10 суток слабо пептонизирует, .через 15 суток створаживает. Лакмус обесцвечивает. Крахмал гисц олизует. Усваивает глюкозу, сахарозу. Не сфаживает лактозу, галактозу, мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу. На среде Кларка образует ацетилметиларбинол, интенсивность кислотоофазоания слабая. Культура Baicie.e-us 5ut i2-is 163 обадает устойчивостью к вирупевтным фагам. Источники информации, ринятые во втшмание при экспертизе 1. Авторское сшдетельство СССР b 283152, кп. С 12 К 3/00, 187О.