Способ получения иммобилизованной пектиназы Советский патент 1984 года по МПК C12N11/14 

изобретение относится к получению иммобилизованных ферментов, в частности пектиназы/ Которая применяетс в различных отрасляк пищевой промыш ленности и в научно-исследовательской работе. Иммобилизованные ферменты позволяют устранить три важнейчше причины ограниченного применения ферментов: труднодоступность чистых ферме тов, ойнократное их использование, неустойчивость. Иммобилизация, в частности, пёктиназ является важной проблемой, особенно в связи с ее : использованием в пищевой промыиШенности, так как этот фермент в иммобилизованной форме рбесдечи ва.ет мно fSftgaTHocTb йспелъзОваШя энзима, исключает стадию отделения отработа шего фермента от сока, создает усло вия для ведения непрерывного процессаИзвестно.несколько способов получения иммобилизованной пектиназы, однако все они включают трудоемкие этапы синтеза носителей либо основаны на применении высоких температур в процессе получения биокатализаторов tfl . :, Известен способ получения иммоби лизованной пектиназы, включающий синтез носителя И связывание с ним фермента в фосфатномбуфере, рН 5,0 Фермент используют в.виде 10%-ного раствора, реакцию связывания ведут при 4°С 21 V - . Используемый в способе носитель .получают при взаимодействии этиленгликоля с ТолуилендиизоцианаТом при , причем получаемый носитель обладает активными изоцианатными группами . -- V..,, ,..-.: .-., : ,, ... . . ,. .,., ... ...,,,.„„ . , . ,. ... Недостатком этого способа является высокий расход пектиназы (10%), так как образование системы носитель фермент происходит при избытке толу илендиизоцианата в реакционной смеси прич.ем одна его часть расходуется на синтез урЪтана са1 тйШ1ьаШ :изоцианатными группами{ опреленное KOличёство уретайа впоследствии реагирует с ферментом, образуя нужный продукт - препарат реагирует с ферментом, образуя нужный продукт препарат иммобилизованной пектинаэы другая реагирует с изоцианатными группами только что образовавшегося урётана, приводя к возникновению уже неактивных в отношении фермента алло фонйтныхгрупп, а третья, непрореагировайая часть, остается в реакцион ном растворе. При добавлении фермента к последнему часть энзима, как

5iO-CQ-NH-CCHaU-N O указано выше, СЕ язывается с уретаном и дает пенополиуретановый ферментный Препарат, остальная же часть реагирует со свободным толуилендиизоцианатом и при промывке конечного продукта удаляется. 1фоме того, процесс получения комплекса фермент - носитель сравнительно сложный: работа проводится как при оУйбсйтёльно высоких, так и при нйзких температурах, реакция уретана с ферментом зкзотермична, что требует обеспечения условий,, исключающих инактивацию пектиназы. Недостатками известного способа являются Также относительно небольшая поверхность носителя, так как пОлиуг)ётановая пена, полученная по описанному способу, обладает макроструктурой, и проведение иммобилизации пектиназьа в среде органических реагентов, отрицательно влияющих на активность ферментов. Целью изобретения является упрощение проце.сса, экономия сырья (при обеспечении высокого выхода активности катализатора). Цель достигается тем, что в качестве носителя используют силохром, обработанный ДиизоциаНатом адипиновой кислоты,1,б-гексаметилендиамином и повторно динзоцианатом адипиновой кислоты, а связывание фермента с носителем проводят в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном pacTBQpe 1-3%. Согласно изобретению способ получения иммобилизованной пектиназв состоит в связывании её с силохромок, обработанным диизоцианатом адипиновой кислоты, 1-б-гексаметилендиаминрм и повторно - диизоцианатом адипиновой кислоты, причем связывание прО водят в водной среде при 18-20 С и концентрации фермента в исходном растворе 1-3%. Носитель обладает микроструктурой и вследствие этого значительной поверхностью, что обеспечивает высокую эффективность каталитического действия при наличии связанного фермента. Эффективность каталитического действия, как известно, определяется величиной поверхности носителя - чём больше эта величина, тем бол.БШе на носителе связывается фермента и тем эффективнее действует катализатор. Обработйа силохрома диизоцианатом и 1,б-гексаметилендиамином (последний служит вставкой, обеспечивающей стерическй выгодное расположение молейул фермента при связывании) проводится по следующей схеме:

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИ- ЗОВАННОЙ ПЕКТИНАЗЫ путем связывания ее с нерастворимым носителем, содержащим изоцианатные группы, о т л и.чающийся тем, что, с целью упрощения процесса и экономий сырьй/ в качестве носителя используют силохром, обработанный дийзоцианатом адипиновой кислоты,1,6-гексаметилендиамином и повторно - дииэоцнайатом адипиновой кислоты, а связывание фермента с носителем осуществляют в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном растворе 1-3%. (Л с: 00 о:) ел