Способ стабилизации ферментных препаратов Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 

составляет 1 ч при температуре 20°С. Полученную суспензию фильтруют, к 320 мл фильтрата добавляют 640 мл охлажденного до 4С этилового спирта, в который предварительно вносят 6,4 2,510 М спиртового раствора 8-меркаптохинолина. Через 3 ч надосадочную жидкость декантируют. Полученный осадок растворяют в 1%-ном растворе цитрата натрия до конечного объема 200 мл и фильтруют. Из полученного фильтрата уреазу охлаждают 600 мл охлажденного до 4°С этилового спирта, в который предварительно добавляют 6 МП 2,5, раствора 8-меркаптохинолина в этиловом спирте. Осадок промывают холодным ацетоном, затем высушивают. Получают: 6, 5 г уреазы с удельной активностью 1700 ед. Самнера на 1 г белка

При хранении препарата в течение года при комнатной температуре потери активности не превышают 5% от исходной.

П р и м е р 2. 100 г сухих дрожжей Saccharomyces tragills экстрагируют 1 л 10 М фосфатного буфера рН - 6,9, в который предварительно добавляют 20 мл 2,5 З-меркаптхинолина в этиловом спирте. Время экстракции 8 ч при температуре . Суспензию центрифугируют, полученный осветленный раствор концентрируют в 5 раз с использованием ацетахцеллюлозной мембраны УАМ 300, концентрат npONBJBcuoT диафильтрацией двойным объемом 10 М фосфатного буфера, содержащего 0,5% MgCIj. К 200 мл концентрата добавляют 200 мл глицерина, В который пpJSДвaIHIтeльнo добавляют 4 мл 2,5 10 М раствора 8 меркаптохинолина в этиловом спирте.

Удельная активность полученного ферментного препарата составляет ед/мг белка, концентрация белка л-10 Кг/мл.

После хранения ферментного препарата в течение 5,5 мес. при потери активности не превышают 13% от исходной.

5 В таблице представлены результаты сопоставления стабилизирующего эффекта 8-меркаптохинолина {8-МКХ) и меркаптоэтанола (МКЭ) с ЭДТА.

Из таблицы следует, что для стабилизации уреазы требуется в 100 раз меньшая (молярная) концентрация 8меркаптохинолина по сравнению со сэлесью меркаптоэтанола и ЭДТА, причем потеря в активности фермента за один и тот же срок хранения при комнатной температуре снижается с 27 до 4%.

При стабилизации В -галактозидазы предлагаеквлм агентом требуется в 10 раз меньшая (молярная) концентрация, чем р -меркаптоэтанола, причем удельная активность фермента при очистке с предлагаемым стабилизатором возрастает в 1,6-2 раза, а потери активности при хранении фермента снижаются с 25 (стабилизатор меркаптоэтанол) до 13%.

Предлагаемый стабилизатор как нелетучее и нетоксичное соединение обеспечивает охрану окружгиощей среды при стабилизации фе ж ентов, исключая применение токсичного,с резким запахом, действующего на центральную нерную систему.

Технико-экономический эффект предлага.емого технического решения заключаетбя в обеспечении стабилизации ферментов, в частности, уреазы и р-галактозидазы в технологическом процессе выделения и очистки, а такж в процессе их хранения.

Экономический эффект составит 170 тыс.руб. в год.

Уреаза без стабилизирувзщего агента

Урер1за МКЭ + 2-10 М

ЭДТА

}

„-4

Уреаза 2,5-Ю М МКХ (25 мк 8-МКХ на 1 г урюазы)

-Галактозидаза .5-10 М МК

-Галактозидаза 5 10 1 -МКХ (125 мкМ на 1 г фермента)

59

11,5

73 11,5

11,5

96 49

5,5

87

5,5 Формула изобретения Способ стабилизации ферментных препаратов, предусматривающий введение соединений, связывающих ингибиру щие ферменты вещества, отличаю щийся тем, что, с целью повышения активности ферментов и предотвращения заражения окружающей среды токсичными веществами, в качестве соединения, связывающего ингибирующие ферменты вещества, используют 8-меркаптохинолин в количестве 25125 мкМ/г фермента. Источники информации, принятие во внимание при экспертизе I.Wiseman D.А,Industrial Enzyme Stabilisation. - J. Process Biochemestry, рр.14т15, 1973. 2. Wong B.L., Shore C.R. Singlestep purification of urease by affinity chrcmatography. - Canadian Q.Microbiology, v.20, pp.,