Питательная среда для культивирования продуцентов липолитических ферментов Советский патент 1980 года по МПК C12K1/06 

Изобретение относится к молочной лромышленности и щЗедставляет собой состав питательной среды, используемой для глубинного культивирований микроорганизмов-продуцентов липолитических ферментов. Известна питательная среда для культивирования продуцентов липЪлитических ферментов, включающая соевую муку, сахарозу, двухзамещенный фосфорнокислый магний, мел, оливковое масло и воду l . , К недостаткам известной питательной среды относится то что она не является оптимальной как по качественному, так и по количественному составу. Известна также среда для культивирования плесени G.cand idlim (среда А) следующего состава, %: соевая мука 2,0; мочевина 0,2; сахароза 0,2; К2НР04 0,1-, КН2,Р04 3H,jQ 0,4, MgS04 0,1; СаСО 0,5; оливковое масло О,5.Однако ее исходный рН равен 9,2, в то время как опти.мальный -7,0 23. Доведение кислотности среды цо 7,0 сопряжено со значительными трудностями, так как буфернодть ср к рН :., по ка те су но еды низка, что приводит Значит;ельнрму Изменению величины после стёрилизгщии (табл.1). ;.; ;-:::.: ;:::-.-- -;- Т ei б л и ц а 1 Кислотность средь А целью изобретения является вышение выхода фермента и унифиции качественного состава среды. Поставленная цель достигается , что в нее дополнительно вводят ьфат аммония при следующем соотении компонентов,«ее.% г Соевая мука 2,55-5,2 Сахароза 0,03-0,28 Двухзаме щенный фосфорнокислый0,18-0,20 калий Сернокислый 0,08-0,10 магний 0,19-0,72 I Мел Оливйойое мас0,5-0,7 ло Сульфат аммо0,05-3,38 ния Остальное Вода Предложенная питательная среда получается следующим образом. С целью повышения исходной кислотности среды для Geotrichum сапdldum мочевина, придававшая щелочную реакцию, заменена на эквивален ное по содержанию азота количество сульфата аммония. Это обеспечивает с одной стороны, более стабильное поддержание рН -до й пбслё eWgKSHзации (табл,2),с другой - позволя ет несколько упростить состав сред за счет удаления кислой фосфорнокислой соли (KHjPO). Кроме того, такое изменение достава среды не отразилось на уровне биосинтеза экз6фермен а. Йодифицированная так образом среда (среда Б) имеет сл дующий состав,%: соевая мука 2,555,2, (N84)2504 0,44, К2НР04 0,2, сахароза 0,2, МдSO4. 0,1, CaCOgO,5, оливковое масло 0,5. Таблица Кислотность среды Б ------ -- --;- Далее осуществлялась оптимиза ция среды Б °спбКЩью нирования экспериментов применител к G..cand id urn. Оптимизация проводил по 4-м компонентс1М среды, в наибол щей степени влиявшим на биосинтез мента (соевая мука,сульфат ассония сахароза,мел).Остальные вещества с ды присутствовали в неизменных кол 4eidT;ii x. В результате установлено, что оптимальной для биосинтеза экзолиа пазы культурой Geotrichum candidum Link BKMFj72pl7 является питательна среда следуки1его состава, %: соевая мука 2,6 (NN4)2S04 1,32у саха роза О,13;мел 0,52; К2НР04 0,2; MgS04 О, Г; оливковое масло 0,5; вода - остальное. При использовании указанной среды активность культуральной жидкости Geotrichum candidum Link BKMF-2017 повышается в 1,5 раза. Пример 1. Среда (100 мл) готовится на водопроводной воде и имеет следующий состав,%: соевая мука 2,6; (NN4)2804 1,38; сахароза 0,13; мел 0,52; К2НРО4 0,2; MgS040,l, Оливковое масло 0,1; вода - остальное . Кислртность среды перед стерилизацией доводится до 7,1-7,3. Стерилизация при 1 атм в течение 15 мин. Среда инокулируется суспензией, полученной смывом биомассы 3-4-х суточной культуры гриба с поверхности сусло-агара 10 мл стерильной воды из расчета 4 мл суспензии на 100 мл среды. Культивирование проводится при 26-28 с на круговых качалках со 170-190 об/мин в колбах на 1л. Продолжительность культивирования 80-90 ч. Активность экзолипазы гриба к этому времени достигает 1000-1050 ммолей олеиновой кислсУты на 1 мл отцентрифугированной культуральной жидкости (субстрат - 40%-ная эмульсия оливкового масла в водном 2%-ном растворе поливинилового спирта; буфер фосфатный, 1,15 М, рН 5,5; продолжительность реакции 1 ч при З7с) . Для культур Rhizopus nigricans Ehrenb BKMF-2018 и PeniciBeium roqueforti Thom BKMF-2019 указана питательная среда следующего состава (среда В),%: соевая мука 2,5, дрожжевой экстракт 0,5; (NN4)2504 0,1; KjHPO 0,5. Однако проверка показала, что среда Б обеспечивает биосинтез липаз обеими культурами с более высокой удельной активностью, чем среда В (табл.3). Таблица 3 Удельная активность липаз, полученных- на различных средах ( КОИ) Мг белка П р и ч а н и е.Активность ферментов определяют по гидролизу эмульсии молочного жира при рН 5,5.