Способ лечения гнойно-септических заболеваний Советский патент 1980 года по МПК A61K38/16 

I

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных гнойно-септическими и другими заболеваниями.

Известен способ лечения гнойно-септических заболеваний с использобанием стафилококковой плазмы и иммуноглобулина fl.ff

Однако известный способ не возволяет прогнозировать эффективность иммунотерапии.

Целью .изобретения является прогнозирование эффективности иммунотерапии. .15

Этацель достигается тем, что в KpOBh больных перед лечением предварительно определяют количество лейкоцит4в, несущих рецепторы для Fc-фрагментов иммуноглобулинов, и способ- М ность к сенсибилизации антистафило кокковыми иммунопрепаратами, и при наличии 8% и более лимфоцитов и 10% и более гранулоцитов в количестве бо- лее 100 мкл крови, имеющих Fc-рецеп- торы, и положительной реакции на сенсибилизацию прогнозируют эффективность иммунотерапии. Способ осуществляют следующим образом.. 30

Лейкоциты вьаделяют из гепаринизированной крови обычным способом. Определение на них рецепторов для Fcфрагмента иммуноглобулина- Q проводят методом розеткообразования с эритроцитами быка или голубя, обработанными субагглютинирующими концентрациями антисыворотки, полученной у кроликов после многократной иммунизации соответствующими эритроцитами. Для этого эритроциты предварительно отмывают не менее 3-х раз физиологическим раствором так,, чтобы не было их лизиса, и готовятих 50%н:ю суспензию. К 1-2 мл этой суспензии добавляют 2 объема кроличьей npo-тивоэритроцитарной сыворотки в разведении, превышающем в 2 раза ее агглютинационный титр. Этот титр предварительно определяют в реакции агглютинЕЩии с данными эритроцитами. Помешивая, смесь инкубируют 30 мин при З7с. Обработанные эритроциты отмывают 3 раза физиологическим раствором и готовят их 2%-ную суспензию. 0,2 мл этой суспензии добавляют к равному объему суспензии лейкоцитов (концентрация 2 млн/мл). Смесь инкубируют 15 мин при и ночь при 4 С. Затем осадок ресуспендируют и

784877 добавляют 2 капли 0,6%-ного раствора глютаровогй альдегида. Через 20 мин из .суспензии готовят мазки, которые фиксируют метанолом и окраши вают галлоЦианин-хроКювыми квасцами. На мазках подсчитывают процент pdзеткообразующих лимфоцитов и грануло цитов присоединивших более 3 эритро цитов, которые имеют Fc-рецёптбры. На основании анализа крови, выполнен ного одновременно, определяют ко- . личество Лимфоцитов и гранулоцитовс Fс-рецепторами в 1 мкл крови. Способность лейкоцитов больных воспринимать сенсибилизацию от антибактериальных сывороток и иммуногло булинов определяют следующим образом. Суспензию лейкоцитов крови или выделенные на градиенте плотности фиколл-верографин лимфоциты и грану лоциты разводят в растворе Хенкса до конечной концентрации 5 млн/мл.К 0,S-2 мл этой суспензии добавляют равный объем антибактериальной сыворотки или иммуноглобулина, которые предполагается вводить больному.Лейкоциты инкубируют с препаратом 30 мин -1ч при 37°С. Затем дважды «отмывают их раствором Хенкса, центрифугируя при 1000 об/мин по 5 мин.О док лейкоцитов ресуспендируют Е раст воре Хенкса до концентрации 25 млн/мл. Результаты по переносу сенсибилизации лимфоцитам оценивают в реакции подавления миграции лейкоцитов, используя антигены стафилококка.Если антигены стафилококка подавляют мигра Цию лейкоцитов, обработаннйх антйстафилококковой плазмой, но не подав ляют миграцию лейкоцитов, обработанных нормальной плазмой, реакция считается положительной. Оценку переноса сенсибилизации гранулоцитам проводят в реакции их лизиса. Для этого суспензию гранул цитов (0,25 мл) инкубируют с равнь1м объемом различных разведений антиге Нов стафилококка. К контрольным пор

Результаты иммунотерапии детей, больных гнойносептическими заболеваниями циям гранулоцитов антиген не добавляют или используют антиген другой специфичности (стрептококка и др.). После инкубации 30 мин при центрифугируют при 1000 об/мин, 10 мин,надосадочную жидкость удаляют, а к осадку добавляют 0,1 мл,а,1%-ного раствора трипановой синьки с эозином, приготовленных в растворе Хенкса. Каплю взвеси лейкоцитов наносят в камеру Горяева и подсчитывают процент живых (неокрашенных) и мертвых (окрашенных) клеток и определяют цитотоксический индексг -сГ /у, где а - процент живых клеток в контроле, б - процент живых клеток в опы те. При индексе Ь.0,15 реакция переноса сенсибилизации лейкоцитам считается положительной. Пример Предлагае мй способ был применен для прогнозирования эффективности иммунотерапии антистафилококковой плазмой и иммуноглобулином .40 детей больных гнойно-септическими заболеваниями, подтвержденной стафилококковой, этиологии. Кровь берут у детей за сутки до назначе-ния препарата. Выделяют лейкоциты и, определяют среди них лимфоциты и гранулоциты, имеющие Fс-рецепторы для иммуноглобулина-Q. Другую порцию этих лейкоцитов обрабатывают антистафилококковой плазмой или иммуноглобулином по описанному выше способу. Ставят реакцию лизиса и реакцию подавления миграции лейкоцитов с антигенами стафилококковой для контроля с антигенами стрептококка. Рез1ультаты лечения оценивают по клиническому состоянию больных, а также по изменению концентрации антитоксина в сыворотке крови. Данные предварительного обследования лейкоцитов детей на наличие Fc-рецепторов и перенос лейкоцитам сенсибилизации антистафилококковйми препаратами, а также результаты иммунотерапии представлены в таблице.

12

0,3 to,l 0,5 to,2

U,5±0,2 l,6tO,2 +

Продолжение таблицы