Способ получения гиалуронидазы Советский патент 1980 года по МПК A61K37/56 

1

Изобретение относится к биологии и медицине и касается получения ферментных препаратов.

Известен способ получения гиалуронидазы путем экстрагирования раэмель-5 ченной плаценты, осаждения целевого продукта и очистки 1J.

Однако известный способ сложен, длителен и трудоемок из-за использования колоночных методов очистки. Ю

Цель изобретения - упрсяцение способа.

Указанная цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют плацету; человека, которуй экст-|5 Ьагируют бидистиллированной водой, подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6,3-6,4, добавляют гель .фосфата 20 кальция, центрифугируют и лиофилиэируют.

Кроме того, добавляют гель фосфата кальция, содержёцций сухого остатка геля к белку в соотношении 25 0,6-0,7:1.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Свежую или свежезамороженную плаценту размельчают на 30

электрической мясорубке, отмывают охлажденным физиологическим раствором от пигментов крови до получения однородной массы бледно-розового цвета. К 300 г полученной массы добавляют 450 мл (1,5 объема) бидистиллированной воды, рИ взвеси доводят до 9,01 н. раствором МаОН. Экстрагирование гиалуронидазы проводят в течение 18-24 ч при при периодическом перемешивании. Далее взвесь центрифугируют при 4000 об/мин и 4-10°С в течение 30 мин. Из супернатанта осаждают фермент путем снижения рН раствора до 5,0 с помощью 2М ацетатного буферного раствора с рН 4,0; Осадок формируется в течение 30 мин при 3-4 С. Далее осадок отмывают от остатков гемпигмента бидистиллированной водой (рН 6,2-6,4), фермент осаждают центрифугированием и растворяют в бидистнллированной воде с рН - 7,0, объем которой составляет 1/10 от исходного объема экстракта. Полученный раствор соединяют с гелем фосфата кальция в соотношении 0,60-0,70 г сухого остатка геля на 1 г белка вьадерживают при комнатной температуре в течение 20 мин, гель удаляют центрифугированием при 4000 об/мин в течение 30 мин. Нсщосадочную жидкость, представляющую собой раствор гиалуронидазы, стерилизуют фильтрацией, определяют однородность содержание беЛка и специфическую акти ность и лиофилизируют. Предлагаемый способ получения гиал ронидазы технологически прост и досту пен , предусматривает утилизещию ценного сырья, препарат, полученный предлагаемом способом, содержит минимальное количество балластных бепков, следовательно, не будет визывать нежелательных побочных реакций, Формула изобретения 1. Способ получения гиалуронидазы путем экстрагирования размельченной плаценты, осаждения целевого продук-та и очистки, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве источника сырья используют плаценту человека, которую экстрагируют бидистиллированной водой, подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6,3-6,4, добавляют гель фосфата кальция, центрифугируют и лиофилизируют . 2. Способ по П.1, о т л и ч: а юai И И С Я тем, что добавляют гель фосфата кальция, содержащий сухого остатка геля к белку, в соотношении 0,6-0,7:1, Источники инфop зaции, принятые JBO внимание при экспертизе 1. Э;.- BiochevT 1977,V.78ljp. 485-494.