Способ определения остатков пенициллина в молоке Советский патент 1980 года по МПК G01N33/04 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТКОВ ПЕНИЦИЛЛИНА В МОЛОКЕ

1

Изобретение относится к молочной промышленности и касается анализа молока, в частности способа определения в молоке остатков пенициллина, применяемого при лечении животных.

Известен способ определения пенициллина в молоке, предусматриваюший отделение жира в исходной пробе молока, фильтрацию, экстракцию, фильтрацию и очистку экстракта, выпаривание, растворение фильтрата и тонкослойно-хроматографическое определение пенициллина путем нанесения его раствора на пластину, разгонку хроматограмм в смеси растворителей и проявление хроматограмм 1.

Недостаток способа состоит в том, что он длителен, трудоемок и не может быть применен для ежедневных серийных анализов.

Цель изобретения - ускорение процесса и повышение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в исходной пробе осуществляют осаждение белков молока ацетоном в соотношении 1:2, отделение жира ведут экстракцией его хлороформом и полученный после выпаривания фильтрат растворяют в этиловом спирте, а при тонкослойно-хроматографическом определении пенициллина его спиртовой раствор наносят на силуфоловую пластинку, для разгонки хроматограмм используют смесь растворителей этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40:20, при этом проявление хроматограмм осуществляют парами йода.

Предлагаемый способ позволяет определить минимальное количество пенициллина в молоке не ниже 0,5 мг/л.

10 Способ осуществляют следующим образом.

В коническую колбу с притертой пробкой помещают 25-50 мл молока и приливают двойной объем ацетона (50-100 мл). Закрыв колбу пробкой, тщательно переме15шивают содержимое. Спустя 3-5 мин отфильтровывают белок через складчатый фильтр в делительную воронку со щлифом. К фильтрату добавляют 70 мл хлороформа, встряхивают 2-3 мин. После разделения

20 слоев нижний слой отбрасывают, а верхний фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу. Фильтрат упаривают на ротационном испарителе при 90-95°С. Сухой остаток в колбе растворяют в 5 мл этилевого спирта. Аликвоту из этого раствора наносят на хроматографическую силуфоловую пластинку, помещают ее в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе (этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40 : 20). После того, как фронт растворителя достигнет верхнего края пластинки, ее вынимают из камеры, подсушивают на воздухе при комнатной температуре и проявляют в парах йода. При содержании пенициллина в молоке не ниже

Количество пенициллина, внесенного в молоко, мг/л

Контроль 0,4 0,5 1,0 2,0 5,0

Как видно из таблицы, контрольные пробы молока, не содержащие пеницилина не дают на силуфоловых пластинках пятен темно-коричневого цвета.

При содержании выше 0,5 мг/л обнаруживаются четкие темно-коричневые пятна, интенсивность окраски которых возрастает с увеличением концентрации пенициллина.

Пример 1. В коническую колбу емкостью 100-150 мл помещают 25 мл исследуемого молока, содержащего 0,5 мг пенициллина, приливают 50 мл ацетона, тщательно перемещивают. Спустя 5 мин полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 350. мл, приливают 70 мл хлороформа и встряхивают содержимое воронки 3 мин. Нижний хлороформенный слой сливают, а верхнюю фазу через бумажный фильтр фильтруют в круглодонную колбу емкостью 200 мл со щлифом. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе при 95°С. К сухому остатку приливают 5 мл этилового спирта. Из полученного спиртового раствора пенициллина 0,01 мл наносят на хроматографическую силуфоловую пластинку. Затем пластинку помещают в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40:20. После того, как фронт растворителя достигнет верхнего края пластинки, ее вынимают, подсушивают на возду0,5 мг/л он проявляется на пластинке в виде пятен темно-коричневого цвета.

Способ апробирован в лабораторных условиях путем искусственного загрязнения молока водным раствором пенициллина. В каtecTBe контроля используют обычное сырое цельное молоко.

В таблице приведены результаты определения пенициллина в молоке по предлагаемому способу (проведено по три определения для каждого опыта).

Результат определения пенициллина в молоке, Rj-0,83-0,85

Bie обнаружен

Обнаружен

хе при комнатной температуре и проявляют в парах йода.

Пенициллин проявляется на хроматеграмме в виде пятен темно-коричневого цвета R ± ,85. Сравнивая величину пятна и интенсивность его окраски со стандартными растворами пенициллина, устанавливают концентрацию его в пробе молока, равную 0,5 мг/л.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет ускорить проведение анализа и повысить его точность.

Формула изобретения

Способ определения остатков пенициллина в молоке, предусматривающий отделение жира в исходной пробе молока, фильтрацию, экстракцию, фильтрацию и очистку экстракта, выпаривание, растворение фильтрата и тонкослойно-хроматографическое определение пенициллина путем нанесенения его раствора на пластинку, разгонку хроматограмм в смеси растворителей и проявление хроматограмм, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения точности определения, в исходной пробе осуществляют осаждение белков молока ацетоном в соотношении 1:2, отделение жира ведут экстракцией его хлороформом и полученный после вьшариван11я фильтрат растворяют в этиловом спирте, а при тонкоj7879866

слойно-хроматографическом определении пе-Источники информации,

нициллииа его спиртовой раствор наносятпринятые во внимание при экспертизе

на силуфоловую пластинку, для разгонки1. Von J. Натапп, А. ТоПе, А. Bluthgen

хроматограмм используют смесь раствори-und W. Heeschen. Untersuchungen uber Nachтелей этилацетат-уксусная кислота в соот-weis, Isolierung und Identifizierung von Anношении 40 : 20, при этом проявление хро- 5tibiotikaruckstanden in der Milch.-«Milchматограмм осуществляют парами йода.roissenschaft, 1975, v. 30, s. 1-7.