Способ определения состояния клеточного иммунитета Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 

. Изобретение относится к медициНе и может быть использовано для выяснения этиологии и диагностики ряда заболеваний. Известен способ определения сое тояния клеточного иммунитета путем проведения реакции между лейк цитами исследуемой крови и антигеном с последующим инкубированием реакционной смеси и определением адгезивных свойств лейкоцитов l. Однако известный способ требует больших объемов крови (15-20 мл) , трудоемок и длителен. Целью изобретения является уско рение и упрощение способа. Эта цель достигается тем, что для проведения реакции используют цельную дефибринированную кровь, реакционную смесь помещаиот в миграционные капилляры ПерфильеваГабе, затем центрифугируют и по ст пени уменьшения зон адгезии лейкоцитов в капиллярах определяют состояние клеточного иммунитета-. Определение клеточного иммуните та осуществляют следующим образом Исследуемую кровь, взятую у пац ента из локтевой вены в количестве 1-2 мл, хефнбрийируют при помощи стеклянных бус диаметром около 2 мм, вносят по 0,1 мл в лунки из аппарата Такачи. В эти лунки при помощи петель из названного аппарата прибавляют по 0,025 мл антигена и его контроля (в одну лункуантиген , в другую - контроль).Из каждой лунки заполняют кровь по две пластины с миграционньлми капиллярами (всего по 10 капилляров). Затем пластины маркируют, торцовые отверстия капилляров герметизируют зубным цементом и после затвердения последнего центрифугируют 10 мин. при 450 д. При этом происходит четкое расслоение крови в капилляре на зону эритроцитов, зону прилипших лейкоцитов и зону плазмы. Замер длины зоны прилипших лейкоцитов в капилляре производят при помощи окуляр-микрометра под микроскопом при увеличении в 56 раз и выражают, в единицах шкалы микрометра. Показателем выраженности клеточного иммунитета служит индекс ингибиции прилипания лейкоцитов (ИИПЛ), который вычисляют по формуле0-feV ИИПЛ-1ОО

где T(j - средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капиллярах, содержащих кровь с антигеном;

1, - средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капиллярах, содержащих кровь с контролем антигена. Способ поясняется следующими примерами .

Пример 1. Отделение коревого клеточного иммунитета.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемой дефибринированной крови-. В первую лунку добавляют 0,025 мл коревого антигена в рабочем разведений. Рабочее разведение данной серии антигена находят .предварительно путем построения кривой зависимости выраженности реакции при серийных разведениях антигена с кровью доноров заведомо .иммунных. В качестве коревого антигена используют культуральную жидкость перевиваемых клеток ПАО, инокулированных штаммов Ленинград-4 или Эдмонстон вируса кори. Во вторую лунку, добавляют 0,025 мл контроля антигена в разведении соответствующем рабочему разведению коревого -антигена. В качестве контроля антигена используют культуральную жидкость незараженных клеток ПАО.

После перемешивания крови с антигеном (или .контролем антигена) из каждой лунки заполняют по две пластины с капиллярами (из кгиждой лунки по 10 капилляров). Торцовые отверстия капилляров герметизируют зубным цементом и, после затвердения последнего, центрифугируют 10 мин при 450 д. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах, : вычисляют .среднюю арифметическую для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина зоны лейкоцитов в опытных капиллярах равн1д 8,3+0,9 единиц щкалы микрометра и в контрольных 16,oTl,4.. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равен

оо(1 -- 1оПример 2. Определение кле- Точного иммунитета к вирусу клещевого энцефалита.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемой дефибрини рованной крови. В первую лунку добав ляют 0,025 мл антигена вируса клещевого энцефалита в рабочем разведении, а во вторую лунку - контроль антигена в том же объеме и в аналогичном разведении. В качестве антигена вируса клещевого энцефалита используют надосадочную жидкость гомогената мозга белой мыши,- инокулированной штаммом Софьин вируса клещевого энцефалита. Контролем антигена служит

надосадочная жидкость гомогената головного мозга интактной мыши.

Кровь перемешивают с антигеном (или с контролем) и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия последних герметизируют и пластины С капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 д. Замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте равна 8,б10,98 и в контроле 15,9+0,74 единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкопитов .равен

(-1- V-460/0.

Пример 3. Определение клеточного иммунитета к туберкулину.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемой дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл коммерческого туберкулина в рабочем разведении, а во втбрую лунку - контроля антигена которым служит среда № 199, при помощи которой разводят туберкулин. Кровь перемешивают и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия капилляров герметизируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин. при 450 д. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 6,9+0,8 и в контроле 16,2 2,0 единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов раве

°°0-|ж)- °Пример 4. Определение клеточного иммунитета к экстракту белого вещества мозга.

В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемой дефибринированной кров-и. В первую лунку добавляют 0,025 мл рабочего разведения экстракта из белого вещества мозга, приготовленного по Casals, а во вторую лунку в этом же объеме контроль антигена, которым служит среда 199, лри помощи которой готовят и разводят экстракт.

Кровь перемешивают и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия капи.лляров герметизируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 д. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 11,9+ 1,3, а в контроле 16,5Tl,l единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равен ооО-Ш Предлагаемый способ позволяет повысить производительность труда (расход времени на одну реакцию при мерно 0,5 ч, а при известном спосо бе - около 5ч). Благодаря использованию в качест ве исследуемого материала цельной крови и капилляров Перфильева-Габе в предлагаемом способе затраты исследуемой крови существенно сокраща ются. Так, при исследовании клеточного иммунитета к 1-2 антигенам предлагаемым способом достаточно 0,6-0,8 мл крови, в то время как при известном способе для этих целей необходимо 15 мл крови. Формула изобретения Способ определения состояния клеточного иммунитета путем проведения реакции между лейкоцитами исследуемой крови и антигеном и определением адгезивных свойств лейкоцитов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для проведения реакции используют цельную дефибринированную кровь, реакционную смесь помещают в миграционные капилляры Перфильева-Габе, затем центрифугируют и по степени уменьшения зон адгезии лейкоцитов в капиллярах опра4 деляют состояние клеточного иммунитв та. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе . 1. Haltiday W.G.,Maeuish Aj Jsbi-r sherW.H.Defection of antitremour eett mediated inununity and -jserum btocking factors in cancer patients by tlie teucocite adherence inhibition test.-British J. Cancer, 1974, 29,1, p.34