Способ определения фосфоновыхКиСлОТ B биОлОгичЕСКиХ жидКОСТяХ Советский патент 1981 года по МПК G01N33/52 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОНОВЫХ КИСЛОТ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Изобретение относится к медицине/ а именно к оценке фармакологического действия фосфоновых кислот. Известен способ определения фосфоновых кислот в биологических жидкостях путем их выделения с последующим разрушением С-Р-связей и колориметрией Til. Однако данный способ не отличался достаточной точностью. Целью изобретения является повышение точйости способа. Пост/1вленная цель достигается тем что фосфоновые кислоты выделяют на аниойообменной смоле, содержащей группу четвертичного триэтаноламмони евого соединения, далее элюцию осуществляют растворами соляной кислоты в возрастающей концентрации 0,1-0,5 0,8-1,0 и 2,0-2,2 н., а разрушение связей С-Р осуществляют хлорной кислотой. Пример 1. Определение ОЭДФ 100 мл нативной мочи, содержащей 1-10-40 мкмоль ОЭДФ или 2 мл депроте инизированной (10% ТХУ) сыворотки, содержащей 0,1-0,5 мкмоль ОЭДФ после центрифугирования и добавления 2,5% МаОН.до рН 7,0, осторожно наслаивают на колонку с анионитом в с - форме и пропускают со скоростьюЗ,0 мл в 1 мин. Адсорбированные на анионите фосфоновые кислотыэлюируют последовательно 0,5; 1 и 2 н. НС по 100, 80 и 50 мл соответственно для элюции неорганических,органических с С-О-Р-связью и фосфоновых с С-Р-связью соединений. Последние 50 мл, содержащие только фосфоновые (С-Р-связь) кислоты, помещают в центрифужный стакан, подщелачивают 2 н. NaOH (рН 8), осаждают 2,5 М . центрифугируют, осадок разводят в минимальном (1-3 мл) количестве 2 н. НС, переносят в центриф жную пробирку, снова осаждают, прибавляя по каплям 10 М NaOH, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, к осадку добавляют О,5 мл 5%-ного гипохлорита натрия, перемешивают, оставляют на 10 мин, затем добавляют 0,5-1 мл 1 н. НС1 до прекращения вьщеления пузырьков, добавляют 0,5 мл молибденового реактива, через 3 мин добавляют О,1 мл раствора амидола и через зр мин замеряют на ФЭК при красном светофильтре. Выход ОЭДФ 96,4%. Пример 2. Определение АЭФ. 100 мл нативной мочи, 5-10 мл спинно-мозговой жидкости или 2 мл дёпротеинизированной сыворотки, содержащей 0,1-1 мг АЭФУ наслаивают на колонку с анионитом в CH jCOO-форме и пропускаютэлюант со скоростью 2,0 МЛ в 1 мин. Дальнейшее определение проводят по примеру 1. Выход АЭФ 93%. При м е р 3. Определение ФУК. 100 мл нативной мочи или 2 мл дёпротеинизированной сыворотки, содержащей 1-10 мкг ФУК наслаивают на колонку с анионитом и пропускают элюант со скоростью 3,0 мл в 1 мин. Дальнейшее определение проводят по примеру 1. Выход ФУК равен 95%. Предлагаемый способ позволяет повысить выход фосфоновых кислот до 90-96% при ошибке 5-8%. Формула изобретения Способ определения фосфоновых кис лот -в биологических жидкостях путем их выделения с последующим разрушением С-Р-связей и колориметрией, о тл и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, фосфоновые кислоты выделяют на анибнообменной смоле, содержащей группу четвертичного триэтаяолаМмониевого соединения, далее элюцию осуществляют растворами соляной кислоты в возрастающей концентрации О, 0,8-1,0 и 2,0-2,2 н., а разрушение связей С-Р осуществляют хлорной кислотой . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Bisaz, R. Felix arid Н. Fleisch, Quantitative determination ot Ethane-1-hydroxy - 1,1-diphosphonate in urihearid plasMa. Clin. chlim.acta, 1975, 65, p. 299-307.