получают путем алкилирования про- межуточных соединений общей формулы . 1, где R и R имеют приведенные значения, в результате образуется соединение формулы
где Rl , R и R3
имеют значения. указанные выше,
формильная группа и группа R уда ляются обычными способами и выделяется соединение формулы Г.
Промежуточные б-N-замещенные 3-N-формилкамициновые соединения формулы Г, приведенной выше, являются новыми соединениями, и согласно настоящему изобретению, их получают по способу, основанному на известной реакции формилирования аминов ,
Согласно способу получения 6-Ы-замещенного 3-N -формилканамицина общей формулы I, соединение общей формулы
НО ..cJHzNHB
-НО J|ч
ннг
где R и R имеют указанные выше значения,
формилируют 4-нитрофенилформиатом в водном растворителе в присутствии основания, и полученное соединение подвергают селективному гидролизу для удаления формильной группы из 1-амино-положёния, при этом формильная группа в 3-положении остается нетронутой. Селективный гидролиз осуществляют разбавлением раствором гидрата окиси натрия или калия при рН 12,0-12,5.
-В качестве исходного соединения обычно используют 1 ,б-ди-N-aцeтил{caнaмицин А или 2 ,з,б-три-N-ацетилканамицин В,
-Подходящими растворителями для проведения реакции являются водный диоксан, водный тетрагидрофуран или диметилформамид, реакция осуществляется путем добавления порциями избытка. (например трехкратного) 4 -нитрофенилформиата к производному канамицина.
Для облегчения протекания реакции в смесь добавляется органическое основание, в качестве которого может быть использован, например, триэтиламин. На каждую реакционноспособную аминную группу предпочтительно вводить не Менее одного эквивалента основания. Реакция формилирования обычно заканчивается примерно за 24 ч при комнатной температуре, посл чего продукт можно извлекать обычными методами, например упариванием растворителя или осаждением и при необходимости продукт может дополнительно очищаться.
Стадия селективного гидролиза обычно осуществляется с использова-. ниеьа 1,3-ди-Ы-формильного соединеJ ия, растворенного в воде или водйом органическом растворителе, например, водном диоксане или водном тетрагидрофуране, с помощью разбавленного раствора гидрооксида натрия или калия и рН раствора тщательно доводится до значений, лежащих в пределах 12,0-12,5. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение нескольких дней, причем ход реакции контролируется с помощью тонкослойной хроматографии до тех пор, пока не завершится превращение в 3-N-фopмилпpoизвoдн.oe формулы 1. Затем раствор нейтрализуют добавлением кислоты или, что более удобно, добавлением ионообменной смолы в форме . Преимуществом этого является предотвращение накопления неорганического материала в растворе, а также абсорбция смолой любых побочных продуктов, которые могут расщеплять как 1 так и 3-формильные . Продукт, наконец, выделяют обычными методами, например упариванием до небольшого объема и осаждением органическим растворителе например, изопропанолом. При необходимости далее можно продукт подвергнуть хроматографической очистке, но в общем он достаточно чист для использования .непосредственно в реакциях получения соединений формулы I
Способ получения соединений формулы 1 можно провести с использованием З, б-ди Ы-ацетилканамицина А для получения соединения формулы 11/ в которой Н - ацетил и R - оксигруппа. Аналогично для получ:ения соединения формулы 1, в которой R - группа R - ацетил, может быть использован 2 , 3, б -три-N-ацетилканамицин В.
Тонкослойную хроматографию проводят на пластинах из двуокиси кремний используя .указанную систему растворителей. Пятна наблюдают после высушивания пластин с помощью распыле1НИЯ на них 5%-ного раствора трет-бутил-гипохлорита в циклогексане, и высушивания пластин при 10 мин в термостате с вентиляцией, охлаждения и опрыскивания раствором крахмала и йодистого калия. Тонкослойный электрофорез проводят на 20 см пластинах из двуокиси кремния с разностью потенциалов 900 В 45 мин. Электролит представляет собой смесь муравьиной и уксусной кислот с рН 2/ определение производят, как описано выше. Пример 1. Получение 3,б - ди-N-ацетил-З-Ы-формилканамицина А А) . К суспензии з ,б -ацетил канамицина А (3,9 г) в воде (21 мл) и тетрагидрофурана (21 мл), содержащего триэтиламин (6,91 г), на протяжении 45 мин порциями добавляют 4-нитрофенилформиат (6,88 г). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, а затем упаривают до небольшого объема, вытесняя последние следы воды азеотропной перегонкой с изопропинолом (конечный объем 35 мл) Из раствора осаждают 3,6-ди-М-ацетил-1,З-ди-Ы-формияканамидин А (2,41), который затем фильтруют и сушат род вакуумом при 50°С. При тонкослойном электрофорезе (рН-2) соединение даст величину 0,09, соответствующую канамицину А. Тонкослойной хроматографией при использовании .в качестве элюента метэ нола, этилацетата, аммиака, воды (40:40sl: 30)получают значение R . В). Продукт, полученный по пункту А (2,4 г) растворяют в воде (72 мл} и рН раствора доводят до 12,0-12,5 с помощью 2 н. раствора гидроокиси натрия (2,0 мл). Раствор перемешиваю при комнатной температуре 7 дн, поддерживая рН между 12,0 и 12,5, а затем нейтрализуют добавлением ионообменной смолы Амберлит 1R120 ( ма) (10 мл). Смолу отфильтровывают и фильтрат концентрируют до небольшого объема, причем следы воды удаляют вытеснением диметилформамидом (5 мп), кипячением с обратным холодильником. Затем к раствору диметил формамида медленно добавляют иэопрсзг панол (30 МП) и осадок З ,б -ди-N-ацетил-З-Ы-формилканамицина А (1,75 г), отфильтровывают и сушат под вакуумом при 40С. Полученное соединение достатвчао чисто, чтобы его можно было иейбль- зовать на следующей стадии про(ес;са Образец этого соединения подвергши; дальнейшей хроматографической очйся н на СМ Сефадексе G 25 (Ш Форме), гдев качестве элюента используют 0,1 М раствор гидроокиси аммония. С ЯМР спектр этого соединения полностью отвечает требуемой структуре и подтверждает моноформилйрование 3-аминогруппы. Метойом тонкослойного электрофореза (рН-2) получено значе-. ние 0,43, соответствующее канамицину А. Тонкослойной хроматографией, где в качестве элюента используют смесь метанола, этилацетата, атчмиака,воды (40:40:1:30)( получают значение R 0,23. Пример 2. Получение 2 ,з,6-три-м-ацетил-З-Ы-формилканамицина В. А) . К раствору сульфата канамицина В (80,5 г) и карбоната натрия (76 г) в воде (400 мл) 10 мин добавляют хлорформиат бензила (128г) и раствор 1 ч перемешивают при комнатной температуре.Осс1док собирают фильтрованием, промывают водой, разбавленной соляной кислотой и водой и сушат, получая пеНта-Ы-бензилоксикарбонилканамицин В. Выход 125,7 г. В). Пента-Н-бензилоксикарбонилканамицин В (230,8 г) небольшими порциями 15 мин добавляют к перемешиваемому раствору уксусного ангидрит да (189 мл) в пиридине (346 мл) и дихлорметане (346- мл) , суспензию перемешивают при комнатной температуое 48 ч. Раствор выливают в смесь дихлорметана (1,5 л) и воды (2,3 л). Органическую фазу- отделяют и промывают разбавленной соляной кислотой (рН 4) и водой. Растворитель упаривают до объема 0,75 ли раствор выливают в диэтиловый эфир (4л). Осадок тетра-О-ацетилпента-Ы-бензилоксикарбонилканамицина В собирают фильтрованием и сушат под вакуумом. Выход 244,8 г, 92,6%. С). Раствор тетра-0-ацётил-пента-N-бензилоксикарбонилканамицина В (33,4 г) в тетрагидрофуране (132 мл), воде (66 мл) и уксусной кислоте (3,3 мл) гидрируют на катализаторе 5%-ного палладия на активированном угле (3,3 г) при и давлении 3,5 кг/см 7 ч. Катализатор удаляют фильтрованием и фильтрат концентрируют до объема 25 мл. Остаток обрабатывают гидроокисью аммония (7Н, 81,5 мп) и в течение ночи перемешивают при комнатной температуре. Раствор упаривают досуха, и остаток подвергают хроматографии на колонке с ионообменной смолой Амберлит CG-50 в форме ионов аммония (2 л), элюируя водой, а затем водным аммиаком.. 1 ракции,содержащие требуемый продукт, объединяют и упаривают, в результате чего получают 2,3,6-три-Ы--ацётилканамицин В (9,37 г, 61,6%),т.пл.191198°С (разла ,11макс / KB 1650, 1550 см , R 0,11 (6:3:1:2 - метанол: диэтиловый эфир:вода;О,880 водный аммиак), R 0,11 (40:40:30:1 меанол :этилацетат: вода: О, 880 водный аммиак). Д). К охлажденному раствору 2,3,6-три-Н-ацетнлканамицина В (93 г) в смеси воды (465 мл) , тетра- гидрофурана (558 мл) и триэтиламина (154 г) небольшими порциями 40 мин добавляют и-нитрофенилформиат (153,1 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, а затем концентрируют до небольшого объема под пониженным давлением. Водный концентрат разбавляют изопропанолом до выпаде. НИН продукта в осадок, оставшуюся воду удаляют азеотропной перегонкой с изопропанолом. Окончательно продукт собирают фильтро ванйеь, промывают изопропанолом и сушат под вакуу мом, получая 2, З,б-три-Ы-ацетил-1,3-ди-К- формилканамицин В (89,2 г т.пл. SIO-SIS C ()макс. / КВг 1665, 1545 см , R 0,49 (6:3:1:2 метанол:диэтиловый эфир:вода:0,880 водный аммиак), RjO,54 (40:40:30:1 метанол:этилацетат:вода:О,880 водный аммиак). Е). рН раствора 2,з,6-три-N-ацетйл-. , 322й5 Формилканамицина В (86,9 гГ лВодё (2,61 л) доводят до 12-12,5.,,2гс 4Ш|ью 10 и. раствора гидроокиси натр|1я. Реакционную смесь выдержива й « Прй комнатной температуре 4 дн, .повторно доводя рН раствора до 12 водным раствором гидрооки си натрия, при необходимости затем раствор нейтрализуют добавлением смолы Амберлит 1R 120 ( форма) . Смесь фильтруют и фильтрат подвергают хроматографии на ионообменной смоле Амберлит 200 (NH форма, 5,5 л элюир я водой, а затем - 0,1 н, водным раствором гидроокиси аммония. После Vвыпаривания соответствующих фракций получают 2 ,,3,б-TPH-N-ацетил-З-Ы-формилканамицин В (55,4 Т.пл. 266-268 G (pa3JX)VMe,Hc /КВГ 1665, 1555 см Rf 0,49 (40:40:30:1 метанол:этилацетат:вода:О,880 водный аммиак). Структьфа подтверждена С-13 ЯМР спектроскопией. Формула изобретения l. Способ получения 6 -N-замещеиного З-Ы-формилканамицина общей формулы I где R представляет собой алканоильную группу, содержащую 2-4 атома :углерода, или бензоильную группу R представляет собой оксигруппу или группу формулы - NHR , где R имеет приведенные выше значения, отличающийся тем, что/ соединение общей формулы II НО CJHzNHB где R и R указанзначения. нве ранее, ; формилйруют 4-нитрофенилформиатом в водном органическом растворителе в присутствии основанияj и полученное соединение селективно гидролизуют рЕ збавленным раствором гидрата окиси натрия или калия при рН, имеющем Эначения-от 12,0 до 12,5. 2.Способ по п. 1, о т ли чающийся тем, что в качестве исходного соединения используют 3,6-ди-Ы-ацетйлкана№ цин А. 3.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с я тем, что в качестве ис- ходного соединения используют 2,3, 6-три-Н-ацетилканамицин В. Источники информации, принятые во внимание при SKcneptMse 1. Бюлер к., Пирсон Д. Органические синтезыiM., Ч.1, с. 518.
