Способ определения пировиноградной кислоты в крови Советский патент 1981 года по МПК G01N33/52 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТЫ В КРОВИ

1

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в. клинической биохимии при изучении энергетического обмена.

Известен способ определения пировиноградной кислоты в крови путем получения безбелкового фильтра с последующей обработкой его динитррфенилгидразином и фотометрии смеси l.

Однако известный способ трудоемок и недостаточно точен.

Цель изобретения - повышение точности способа и ускорение его.

Поставленная цель достигается тем, что способ определения пировиноградной кислоты в крови осуществляют путем получения безбелкового фильтрата с последующей, обработкой его динитрофенилгидразином и фотометрии смеси. в реакционную смесь после обработки ее дифенилгидразином вносят водный раствор NaOH.

Пример. 0,1мл капиллярной крови вносят в центрифужную пробирку в которую предварительно наливают 1,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое смешивают и центрифугируют 20 - 30 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в обыкновенную пробирку и

прибавляют 0,4 мл 0,1%-ного динитрофенилгидролизи«а (ДНФГ) и ставят пробу на 20 мин в темное место. Затем приливают 1 мл 1%-ного раствора едкого натрия и через 5 мин фотометрируют при синем светофильтре в кюветах 5 мл. В качестве компенсационной жидкости берут контрольный раствор, который готовят также как опытную

10 пробу, только вместо крови берут дистиллированную воду. Расчет проводят по данным калибровки стандартного раствора пирувата натрия,КОТОРЫЙ обрабатывают так же как опытную про15бу крови.

Калибровочная таблица

Экстинкция

№

Количество пировиноградной кислоты

Пробыв стандарте, мкг

20

4, 8

1,0

1 2

25 2,0

16 32

4,0

3 4 8,0

30

По показателям калибровочной таблицы вычисляют цену одного деления экстинкции в микрограммах Пировиногргадной кислоты для каждой стандартной точки (1,0:4 0,25 2,0:8 0,25; 4,0:16 0,25 8,0:32 0,25 и расчет пировиноградной кислоты в исследуемой кроны проводят по формуле С-К-Б . C -tOOO количество пировиноградгде к ной кислоты в анализируемой крови; -объем крови, в котором тр буется определить количество пировиноградной кислоты; -цена одного деления эксти,нк,ции,мкг пировиноградной кислоты; -экстинкцияопытной пробы; -количество крови, идущей в опыт. 1000 - перевод микрограммов в миллиграммы. Для того, чтобы определить количество пировиноградной кислоты в 100 мл крови в опыт берут 0,1 мл. Це на одного деления экстинкции 0,25 мк пировиноградной кислоты, экстинкция опытной Пробы 5 делений. Подставляя цифровые данные в формулу, получают ч- .Сравнительные данные количествен ногб анализа пировиноградной .кислоты представлены в таблице. Из таблицы видно, что предлагаег ялй способ определения пирувата в 1,5 - 2 раза точнее известного. Предлагаекий способ прост в выполнении, не требует дефицитных реактивов и обеспечивает высокую точность. Формула изобретения Способ определения пировиноградной кислоты в крови путем получения безбелкового фильтрата с последующей обработкой его динитрофенилгидразином и фотометрии смеси, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа и ускорения его, Б реакционную смесь после обработки ее дифенилгидразином вносят водный раствор NaOH. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике. М., Медицина, 1969, с. 254-255.