Способ получения @ -триптофана Советский патент 1981 года по МПК C07D209/20 C12N13/22 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРИПТОФАНА

1

Изобретение относится к улучшенному способу получения L-триптофана, при- меняемого в биоорганической химии.

Известен способ получения L-триптофана из индола , пирувата калия и хлористого аммония с использованием иммобилизованной триптофаназы с добавлением в реакционную смесь пиридоксаль-5 фосфата. Выход триптофана составляет 70%.

Триптофаназу выделяют из штамма Е. B/it-7A. Иммобилизацию осуществляют на BrCN-сефарозе при в течение 10 мин l.

Недостатком известного способа является предварительная очистка фермента, так как это сложная, и трудоемкая процедураJиспользование носителя, активированного BrCN , который является дорогостоящим реактивом, и, наконец, при использовании иммобилизованной триптофаназы в реакционную смесь необходимо постоянно добавлять

пиридоксаль-5 -фосфат, который является коферментом для этого энзима.

Цель изобретения - упрощение технологического процесса.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения L-триптофана взаимодействием индола, пирувата калия и хлористого аммония, в качестве катализатора берут нативные клетки Вас. Subtil Is 339, иммобилизованные в полиакриламидном геле. Это позволяет получить триптофан за счет использования биокатализаторз с триптофансинтетазной активностью без предварительного выделения фермента, что значительно упрощает технологическую цепочку при проведении синтеза, исключает из реакционной смеси кофермент.

Пример 1.2мл нативных клеток Вас. 11 us Subtil is с содержанием белка 100 мг/мл в О ,1 м калий-(1юсфатном буферном растворе рН 7,5,смешивают с 1 мл раствора акриламида и бисакриламида .(75 мг и 25 мг соответственно)н прибавляют на холоду 0,3 мл 5%-ного раствора (NHi,)4S20a , О ,3 мл Nlw.NN-TeTpa метилэтилендиамина. Полимеризацию ведут при 37°С в течение 3 мин. Затем . гель протирают через сито 0,5. мм и промывают калий-фосфатным буферным раствором. Полученный биокатализатор прибавляют в реакционную среду, содер жащую индол 510 М, пируват калия 10 М, хлористый аммоний . В калий-фосфатном 0,1 М буферном растворе рН 7,5.,Общий объем реакционной смеси составляет 30 мл. При этом начальная скорость реакции Vp 0,17 М-мин. При проведении процесса в течение мин выход составляет а при установлении равновесия в системе 9б,9% индола превращается в L-триптован. Пример 2. В2-Х литровых колонках с иммобилизованными клетками Вас. Subtil is (полученных по примеру 1) пропускают раствор, содержащий ;индол с концентрацией , пируват калия и хлористый аммоний 10М Затем раствор проходит через колонку с анионитом ИА-1, на котором осуществ ляют сорбцию триптофана. После пропускания 50 мл раствора через биореактор колонку с анионитом ВЫВОДЯТ ИЗ системы и триптофан элюируют 0,5 г 10 -ного раствора аммиака, раствор упаривают до 50 мл, триптофан высаживают этиловым спиртом. Осадок промывают холодным спиртом. Получают 0,92 г L-триптофана. Продукт идентифицируют методом тонкослойной хроматографии на пластинках Sllufol в системе изопропанол-этиловый эфир-уксусная кислота-аммиаквода (30:30:16:24). Оптическая активность продукта -31° , С 1, Н.О, Т. пл. 28ГС 2824. Формула изобретения Способ получения L-триптофана взаимодействием индола, пирувата калия и хлористого аммония в присутствии биокатализатора, отличающ и и с я тем, что, с целью упрощения технологического процесса, в качестве биокатализатора берут нативные. клетки Bacillus Subtllis, иммобилизованные в полиакриламидном геле. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Fukui Saburo, Eur. J.Appl. Microbiol,,.1975, 1(1); с. 23-39 -j (прототип).