Способ получения S-форм энтеробактерий Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 

1

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Известен способ получения S-форм энтеробактерий путем выращивания диссоциированной культуры на питательной среде 1 I 3

Однако известный способ трудоемок, требует много времени (2-14 сут) и только 92% из числа диссоциированных культур удается перевести в S-форму.

Цель изобретения - упрощение способа и повышение выхода S-форм.

Цель достигается тем, что способ получения S-форм энтеробактерий осуществляют путем выращивания диссоциированной культуры на питательной среде, диссоциированную культуру выращивают в присутствии бактериофага Тз в концентрации частиц фага/мл среды.

При этом выращивание осуществляют на аминопептидном агаре, среде ЭНДО или аминопептидном бульоне.

Способ осуществляют следующим образом. ,

Приготавливают селективную питательную среду. Для этого берут исходные компоненты: бактериофаг Тз в исходной композиции 109 фаговых часг тиц/мл, аминопептидный агар (АПА), расплавленный и остуженный до 40°-43.

В мерную колбу вносят 2 мл фага и 200 мл расплавленного АПА до конеч10ной концентрации фага 10 частиц на 1 МП среды, разливают на 7-8 чащек Петри.

Вместо АПА можно использовать среду ЭНДО или аминопептидный бульон

15 (АПБ). В последнем случае получается жидкая селективная среда для отбора S-форм, которая имеет некоторые преимущества по сравнению с плотными пи- тательными средами.

20

Активность фага в плотной среде при + сохраняется до 4-х недель; в АПБ - неопределенно длительное время. 389 Селекцию S-форм энтеробактерий проводят с помощью питательной среды, содержащей в качестве селективного агента бактериофаг Тз. 0,1 мл взвеси бульонной или агаровой диссоциированной культуры, содержащей 10 -109 бактерий/МП, высевают на чашку с селективной плотной питательной средой, растирают шпаделем. оставляют при 37 С на 20-24 ч. На следующие сутки образуются S-формы колоний, которые отсевают в чистом виде в пробирку в АПБ или скошенным АЛА без фага. Предлагаемым способом достигается ilOO-ная эффективность селекции (т.е. ;каждую диссоциированную культуру возможно перевести в 5-форму), что гаран тирует качество работы. СйЬсоб обеспечивает сокращение вре1;1ени,. селекции до минумума (1 сут), снижает трудоемкость в результате выдейения S-форм после однократного по еева.;-«населективную среду, исключает , ,рабоду -с животными, достигается одномоментное ть технологического процесса обработки селективным агентом и процесса выделения S-форм. Формула изобретения 1. Способ получения З-форм энтеробактерий путем выращивания диссоциированной культуры на питательной среде, отличающийся тем, что. с целью упрощения способа и повышения выхода S-форм, диссоциированную культуру выращивают в прис утствии бактериофага Тз в концентрации 10 10 частиц фага/мл среды. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с я тем, что выращивание осуществляют на аминопептидном агаре, среде ЭНДО или аминопептидном бульоне. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Кауфман Ф. Семейство кишечных бактерий. М., Медицина, 1959, с. 54.