Способ определения локализации белковых зон в электрофореграмме Советский патент 1982 года по МПК G01N27/26 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛОКАЛИЗАЦИИ БЕЛКОВЫХ ЗОН В ЭЛЕКТГОФОРЕГРАММЕ

. I ,,

Изобретение относится к химии, медидане, а именно к электрофоретическому разделению и выделению индивидуальных белков.

Избестен способ определения локализации белковых зон в пластинчатых электрофорегрш мах, не содержащих детергенты или амфолины, заключающийся в том, что.от алектрсфореграммы отрезают не менее одной продольной полосы, производят их окраску и удаляют из них непрореагироравшин краситель {1.

Недостатком способа является его длительность.

Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ определения локализации белковых зон в злектрофореграмме путем окрашившшя ее продольной полось в поперечном направлении посреДст вом электрофореза 2.

В данном способе ввод красителя ускорен, однако не устранен недостаток, состоящий в том, что в процессе выявления белковых зон полосы электрофореграммы разбухают

иногда довольно значительно, что затрудняет сопоставление окрашенных полос с неокрашенной частью электрофореграммы.

Цель изобретения - повь1шение скорости и точности определения локализаций белксжых зон на злектрофореграммах.

Цель достигается тем, что в известном способе определенна локализация белковых зон в электрофореграмме путем окрашивания продольной полосы гелевого блсжа -с электро10фореграммой в поперечном направлении посредством электрофореза, на геяевую пластину с электрофореграммЫ yctaHaanHBaioT замкнутую по периметру раму из электроизоляционного материала, образующую с поверх15ностью гелевой пластины сосуд, разделенный продольной перегородкой на две камеры, заливают в одну из камер электролит, в другую -. электролит с красителем и через образо в1анную систему электролит с красителем20гелевая пластина - электролит пропускается ток, по окончании окрашивания проводят злектроэлюцию не связанного белком красИ теля, пропуская ток в обратном направления. 39 С помощью предлагаемого способа определяется локализация белковых зон на электро фореграмме в узкой полосе непосредственно в теле гелевой пластины. На фиг. 1 изображена электрофореграмма с разделенными белковыми зернами, на фиг. 2 - один из возможных вариантов крашения, поверхностного слоя электрофореграммы. Способ заключается в следующем. После получения электрофореграммы в гелевой пластине 1, содержащей разделя«1ые белковые зоны 2 (фиг. 1), устанавливают на гелевой пластине 1, раму 3 (фиг. 2) из диэлектрического материала, разделенного перегородкой 4 на две узких камеры 5 и 6, днищем которых является поверхность гелевой пластины I. Продольные оси камер 5 и 6 располагают по направлению миграции белковых зон (показано стрелками). В камеры вставляют электроды 7 и 8. Для окрашивания полосы в одну из камер, например S, заливают фиксирующий раствор (например 7-10% водный раствор уксусной кислоты) и на дно этой же камеры вводят .слой раствора красителя 9 (например амидошверца) в то же фиксирующем растворе, содержащей для увеличения плотнос га, нащяшер, сахарозу. Во вторую камеру 6 может быть залит раствор электролита (напрююр буферный раствор, содержащийся в электрофореграмме). Напряжение подают так, чтобы краситель из камеры 5 внедрился под влиянием электртеского поля в поверхностный слой гелевой пластины 1, пропитанной уксусной кислотой, спустя некоторое время переключают попюса и производят эЛёктроэлюцию красите ля из электрофореграммы. : В результате на поверхности гелевой пластины 1 остается узкая полоса с окрашенными участками белковых зон на чистом фоне При этом отпадает необходимость предварительной пропитки всей толщи гелевой плас тины фиксирующим раствором, содержащим краситель, достаточно слоя, который успеет пропитаться фиксирующим раствором за время подготовки к окрашиванию. Так как окрашенные участки белковых зон не отделены от остальной части гелевой пластины, а также потому, что окрашивание производят только в поверхносйюм слое, вследствие чего изменений размеров окрашенной полосы по сравнению с неокращенной частью электрофореграммы за счет наб)осания -не происходит, достигается точное определение локализации, а затем и вьщеление отдельных белковых зрн из неокрашенной части гелевой пластины с электрофореграммой. Например, локализация гистонов на полизкриламидной гелевой пластине предлагаемь1м способом на тестируемой полоске длиной 10 см и шириной 2 мм при напряжении 100 В занимает не более 60 с. Предлагаемым способом может быть определена локализация белковых зон в злектрофореграммах практически любой формы. Формула изобретения Способ определения локализации белковых зон Вэлектрофореграмме путем окрашивания продольной полосы гелевого блока с электрофореграммой в поперечном направлении посредством электрофореза, о т л ич а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения скорости и точности определения, на гелевую miacTiray с электрофореграммой устанавливают замкнутую по периметру раму с электроизоляционного материала, образующую с поверхностью гелевой пластины сосуд, разделенный продольной пepeгojpoдкoй на две камеры, залитают в одау из камер электролит, в другую - электролит с красителем, и череэ образованную систему электролит с красителем - гелевая пластина - электролит пропускают ток, по окончании .окрашивания проводят ЭЛёктроэлюцию не связанного белком красителя, пропуская ток в обратном направлении. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе Ь Маурер Г. Диск-электрофорез. М., Мир, 1971,115-116,142. 2. Schwabe Ch. Disc- Electroforisis Analytical Biochemistry. 1966, v. 17, № 2, p. 201209 (прототип).