Способ получения уреазы,иммобилизованной на неорганических носителях Советский патент 1982 года по МПК C12N11/14 G01N33/54 

за. Реакцию проводят в фосфатном буферном растворе с рН 7,3, содержащем этилендиамиитетраацетат натрия (ЭДТА) при 4°С в течение 40 часов. Весовые соотношения белка в растворе уреазы i носителя составляют 1:5- 1 ; 10. После окончания реакции иммобилизованный фермент отделяют, промывают тем же раствором, в котором была приготовлена уреаза и определяют его активность.

Пример 1. К 50 мг силохрома с удельной поверхностью 40 и средним

О

диаметром пор 2000 А добавляют 1 мл 0,5% раствора у-АПТЭС в воде. Смесь нагревают до 60-80°С в течение трех часов. Силохром промывают пятикратной декантацией и смешивают с 0,5 мл 0,5% раствора глутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буфере с рН 6,0 и нагревают до 25- 40°С в течение трех часов. После пятикратного промывания водой силохром вводят в реакцию с 8 мл уреазы семян арбуза в 0,1 М фосфатном буферном растворе с рН 7,3, содержащем 10- М ЭДТА. Концентрация белка в растворе уреазы составляет 1,0 мг/мл. Смесь выдерживают при 4°С в течение двух суток, после чего силохром отделяют, промывают тем же буферным раствором, в котором была приготовлена уреаза. Активность иммобилизованной уреазы составляла 3900 ферментативных единиц на 1 г влажного силохрома.

Пример 2. К 50 мг силохрома с удельной поверхностью 74 и средним

о

диаметром пор 1000 А добавляют 10 мл 0,1% раствора у-АПТЭС в этиловом спирте и смесь кипятят в колбе с обратным холодильником в течение трех часов. Силохром отделяют, промывают этиловым спиртом, потом водой и смешивают с 1 мл 0,5% раствора глутарового альдегида в воде. Дале обработку проводят так же, как в примере 1. Активность иммобилизованной уреазы составляет 3400 ферментативных единиц па грамм влажного силохрома.

Пример 3. Иммобилизация уреазы семян арбуза на макропористом силикагеле с удельной поверхностью 70 и диао

метром пор 600 А проводят так же, как в примере 1. Активность иммобилизованной уреазы составляет 1900 ферментативных единиц на 1 г влажного силикагеля.

Таким образом, способ позволяет получать препараты иммобилизовапной уреазы с активностью в 2-3 раза большей, чем в известном способе.

Формула изобретения

Способ получения уреазы, иммобилизованной на неорганических носителях путем последовательной обработки носителя у-аминопропилтриэтоксисиланом, глутаровым альдегидом и затем раствором уреазы с последующим отделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности иммобилизованной уреазы, в качестве носителя используют силохром пли силикагель с

о

диаметром пор от 600 до 2000 А, а в качестве уреазы - уреазу семян арбуза.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. R. Е. Adams, Р. W. Сагг «Coulometric flow analyser for use with immobilized enzu40 me reactors. Analytical chemistry, v. 50, № 7, pp. 944-950, 1978.