Способ получения иммобилизованной пектиназы Советский патент 1982 года по МПК C12N9/14 C12N11/14 

39 Предлагаемый способ дает возможность получатн иммобилизованную пектиназу с активностью 1,28-3,8 Е/г сухого носителя. Пример 1. Юг аминоэпоксиси лохрома, {удельная поверхность 80 обрабатывают 3 ч 1ОО мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистилли рованной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 1О г активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного раствора Нектиназы в дистиллированной воде, пос ле чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного -насоса 0,5ч. Затем суспензию иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхлера 120 мл нитратного буфера рН 4,2; 10О мл I М раствора NaC. и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2. Активность 1,28 Е/г сухого носит ля (активность в исходном ферментном растворе 31О Е/г белка). При хранении при + 4 С препарат те ряет 5О% активности в течение 4 мес. Пример 2. 10 г аминоэпокси- силохрома обрабатывают 3 ч 10ф мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой для исчезновения следов глутарового альдегида в щэомывных водах, потом высушивают пр комнатной температуре. К 1О г активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 5%-ног раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. Затем суспензию иммобилизованного препарата фильт руют и промывают на воронке Бюхнера 120,мл нитратного буфера рН 4,2; 1ОО мл 1 М раствора Ма С и.наконец 80 мл цитра1;ного буфера рН 4,2. Активность 2,41 Е/г сухого носителя (активность в исходном ферментном растворе 310 Е/г белка). При хранении при + 4°С преперат те ряет 50% активности в течение 4 мес. Пример 3. 1О г аминоэпоксисилохрома обрабатывают 3 ч 10О мл 2%-ного раствора глутарового альдегида затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 г активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 36 МП 10%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд, с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. Затем суспензию, иммобилизованного гфепарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 100 мл 1 М раствора No СЕ и наконец -80 мл цитратного буфера рН 4,2. Активность 3,8 Е/г сухого носителя (активность в исходном ферментом расiTBOpe 310 Е/г белка). При хранении при + 4°С препарат теряет 5О% активности течение 4 мес. Пример 4. 10 г аминоэпоксисилсхрома (удельная поверхность 60 м /г) обрабатывают 3 ч 1ОО мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем но- . ситель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 г активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. Затем суспензию иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 100 мл 1 М раствора NaC и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2. Активность 1,18 Е/г сухого носителя (активность в исходном ферментном растворе 310 Е/Г белка). При хранении при + 4 С препарат теряет 50% активности в течение 4 мес. Пример 5. 1О г аминоэпоксисилохрома (удельная поверхность 9О .) обрабатывают 3ч 10О мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 1О г активированного амнноэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. Затем суспензию иммобилизованного пре- 59 парата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 1ОО мл 1 М раствора No Ct и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2 Активность 2,58 Е/г сухого носотеля (активность в исходном ферментном растворе 310 Е/г бег.ка). При хранении при + 4°С препарат теряет 50% активности в течение 4 мес. Форм у л а и 3 о б р е т е н и я Способ получения иммобилизованной пектиназы путем связывания ее в водной 8 среде с предварительно активированным кремнеземным носителем, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, в качестве носителя используют аминоэпоксисилохром, активированный глутаровым альдегидом, с удельной поверхностью 6О-9О , а процесс связывания проводят при концентрации фермента в среде 3-10%. Источники информации, принятые во внимание щэи экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР М5 736592, кл. G 07 С 7/О2, 1978 (прототип).